王贺鹏,郁红礼,2,3,吴皓,2,3,谢雨薇,陶兴宝,曾平,程砚秋,王彩霞,刘冰冰,张萍

    (1.南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023;2.江苏省中药炮制重点实验室,江苏 南京 210023;3.国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心,江苏 南京 210023;4.中国食品药品检定研究院,北京 100050)

    天南星为天南星科植物天南星Arisaemaerubescens(Wall.) Schott、异叶天南星ArisaemaheterophyllumBl.或东北天南星ArisaemaamurenseMaxim的干燥块茎。天南星生品有毒,具有强烈的刺激性毒性,误服会导致剧烈的唇舌刺痛感、流涎、口舌肿胀、咽喉疼痛等[1],因此临床多用炮制品。

    《中国药典》2020年版天南星质量标准缺少毒性控制指标。课题组前期研究发现,天南星中含有的具有特殊结构的针晶复合物是其主要的刺激性毒性成分,该针晶复合物是由草酸钙针晶及凝集素蛋白共同构成[2-5]。针对目前天南星毒性成分控制研究的不足,结合本课题组前期的研究成果,本研究采用HPLC法对35批不同产地、不同批次天南星样品炮制前后针晶含量进行分析测定,采用Western blot法对32批天南星炮制前后凝集素蛋白进行检测,并建立相应限度标准,以期为天南星毒性控制指标的建立提供参考。

    1 材料

    Waters 2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司),包括Waters 2489 UV检测器及Waters Empower Pro色谱工作站。高速离心机(美国Thermo公司)；BP211D电子天平(德国Sartorius公司)。HWS-26电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)。Milli-Q纯水仪(美国Millipore公司)。凝胶成像系统(上海天能科技有限公司);高速冷冻离心机(美国Thermo公司)。

    草酸基准试剂(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：O111918)、磷酸(AR,上海麦克林生化科技有限公司，货号：P816337)、盐酸(AR,上海凌峰化学试剂有限公司,货号：20200715);SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(碧云天生物科技有限公司,货号：P0015L);过硫酸铵(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,货号：A112450);30%丙烯酰胺(北京索莱宝科技有限公司,货号：A1010);Tris-HCl(南京翼飞雪生物科技有限公司,货号：YT0065,YT1010);TEMED(美国Sigma公司,货号：#STBF7873V);标准蛋白Marker(美国Thermo公司,货号：#26616);PVDF膜(美国Sigma公司,货号：IPVH00010);ECL化学发光液(美国Millipore公司,货号：WBKLS0500);兔源天南星凝集素抗体(金斯瑞生物科技有限公司制备);山羊抗兔IgG二抗(H+L)(南京翼飞雪生物科技有限公司,货号：YFSA02);天南星凝集素蛋白(AEL,实验室自制,电泳纯) ......