方冰倩,王亚楠,刘琰,王吓长,康迪,胡立宏

    (南京中医药大学药学院,江苏省中药功效物质重点实验室,江苏 南京 210023)

    雷公藤TripterygiumwilfordiiHook.f.为卫矛科雷公藤属植物,具有祛风除湿,通络止痛的功效[1]。基于雷公藤根提取物制成的雷公藤多苷片在中医药临床实践中应用广泛,可用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎[2-3]、慢性肾炎[4-6]、系统性红斑狼疮[7-8]等自身免疫性疾病的治疗。近年来其适应症不断扩大,研究发现雷公藤制剂具有广谱的抗肿瘤活性,可以抑制多种不同来源的肿瘤细胞增殖,在抗肿瘤领域显示了独特的疗效[9-10]。然而,高剂量的雷公藤诱发多组织器官的毒副作用制约了其在临床中的应用与相关制剂的研发[11-12]。

    雷公藤中的化学成分复杂多样,迄今为止,已经报道的该属化合物单体达400多种,主要成分有生物碱类、二萜类、三萜类等[13-14]。目前有100多种单体化合物被证实具有生物活性,以二萜类雷公藤甲素(Triptolide,TP)与三萜类雷公藤红素(Celastrol,Cel)为代表[14-15]。其中,Cel是最早被分离出来的活性成分,可通过调控细胞增殖、凋亡等多种途径发挥抗炎与抗肿瘤等多种药理作用[16-18]。TP是从雷公藤中提取出的最具代表性的一种环氧二萜内酯类化合物。自1972年首次分离以来,TP在近60株不同来源的肿瘤细胞系中表现出良好的抗增殖活性[9,19]。然而,TP既是药效成分,又是毒性成分,其对转录复合体(Transcription factor IIH,TFIIH)中人着色性干皮病B(Xeroderma pigmentosum group B,XPB)的ATP酶活性的抑制导致其毒副作用不可避免[20]。本实验室前期研究发现不同来源的肿瘤细胞系对TP敏感性不同。其中,单核细胞来源的急性髓系白血病细胞对TP较敏感,TP作用48 h的半数抑制浓度(The half maximal inhibitory concentration,IC50)可达到10 nmol·L-1以下;体内动物实验表明TP在25 μg·kg-1·d-1的腹腔注射剂量下可以有效抑制异种移植瘤的生长[19]。目前全球科研机构正在积极开展TP前药治疗白血病的临床研究[21-22]。

    雷公藤多苷片是目前使用较广泛的雷公藤制剂,主要应用于类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的治疗,临床上尚未能应用于抗肿瘤,同时针对抗白血病的作用鲜有报道[8,23-24]。本研究通过寻找雷公藤多苷片敏感的血液肿瘤细胞株,在敏感瘤株的异种移植瘤模型上进行雷公藤多苷片体内活性验证;进一步对自制雷公藤多苷片提取物中的化合物进行系统分离,然后对其进行细胞水平上的活性评价;最后通过制备液相定向敲除雷公藤多苷片以及自制雷公藤多苷片提取物中的TP,考察其细胞毒活性的变化 ......