王晓戎,黄禹舒,陈仁杰,陈欣德,张田革,NISHIMWE Ange,程峰,吴志浩

    (1.安徽中医药高等专科学校中医学系,安徽 芜湖 241000;2.皖南医学院肿瘤微环境研究室,安徽 芜湖 241002)

    结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤[1],已成为癌症相关死亡的第四大原因[2]。尽管手术切除仍然是唯一能够治愈结直肠癌的方法,但辅助治疗在预防复发和转移方面发挥着重要作用[3]。近年来,中医药在结直肠癌的临床治疗中起到重要作用,逐渐成为癌症综合治疗中不可分割的环节[4]。

    1 材料与方法

    1.1 药物

    将购自亳州市京皖中药饮片厂的藤梨根(产地:四川乐山)2 kg阴干,采用超速破碎仪粉碎,然后用400目滤网过筛备用。取400 g藤梨根粉末加入1 600 mL 95%乙醇,加热、回流、过滤,重复操作2次。将2次得到的澄清液合并,悬蒸至膏状,去离子水50 mL溶解后真空低温干燥4 d,得23.18 g固体粉末(藤梨根生药含量>99%)。取20 mg加入1 mL二甲基亚砜(DMSO)溶解成20 mg·mL-1的储存液以备用。

    1.2 细胞株、主要试剂和仪器

    结直肠癌细胞系HCT-15、LoVo(中科院细胞库),Hoechst-33258凋亡试剂(Beyotime,C0003),Annexin V-FITC/PI试剂盒(BD,556547),Cell Stain染色液(Beyotime,20294),PUMA siRNA(通用生物公司,RX053889),GSK-3β抑制剂1(MEC,HY-126144),AKT cDNA(Addgene,#78778),AKT抗体(CST,#9272)、p-AKT抗体(CST,#4060)、GSK-3β抗体(CST,#9325)、p-GSK-3β抗体(CST,#9323)、Caspase-3抗体(CST,#9662)、PUMA抗体(CST,#4976)、p65抗体(CST,#8242)、PARP抗体(CST,#9532)、β-actin抗体(CST,#3700),PUMA启动子(Addgene,#16591)、NF-κB启动子(Addgene,#61293)。

    垂直电泳仪(BioRad,043BR61501),凝胶成像仪(GE,AI600),酶标仪(BioTek, GluMAX96),硝酸纤维素膜(GE Healthcare,66485),微孔板发光检测仪(Promega, E6521)。

    1.3 方法 ......