陈佳斌,张梦瑶,王单,黄同杏,单进军,杨珺超,宋康,林丽丽

    (1.浙江中医药大学第一临床医学院,浙江 杭州 310053;2.南京中医药大学中医儿科学研究所,江苏省儿童呼吸疾病(中医药)重点实验室,江苏 南京 210023)

    呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的最常见原因[1-2]。临床研究表明,慢性肺纤维化患者感染RSV易引起下呼吸道感染并导致肺功能恶化[3]。动物试验证实[4],RSV感染可加快肺纤维化进程、加剧肺部病理严重程度,其基本病理特征为肺泡结构遭到破坏,肌成纤维细胞过量活化增殖进而分泌大量细胞外基质,逐渐取代正常的肺组织,导致气道重塑。研究表明RSV感染加剧肺纤维化的过程包括病毒吸附、病毒复制、增殖等,涉及多种脂质代谢紊乱[5]。

    中药虎杖是蓼科植物虎杖的干燥根茎和根,入肝、胆、肺经,具有利湿退黄,清热解毒,散瘀止痛,祛痰止咳等功效,临床中常被用于治疗肺纤维化。浙江省中医院宋康教授[6]结合多年临床实践经验,提出治疗肺纤维化处方中应重用虎杖(30 g),取其清热解毒兼活血祛瘀之功。动物实验亦证实,虎杖提取液可显著减少肺组织中羟脯氨酸的含量,参与调控肺组织炎症进程,改善模型大鼠肺纤维化病理损伤程度,对肺纤维化有一定的防治作用[7]。在此基础上,本研究基于脂质组学,进一步探讨虎杖对RSV感染肺纤维化小鼠模型肺组织脂质代谢及炎症过程的影响。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    去离子水(美国Millipore公司);生理盐水(武汉普诺赛生命科技有限公司);甲醇、乙腈(纯度:99.8%,德国Merck公司,货号:I1150307122、I1176330413);甲酸、异丙醇、甲酸铵、乙酸铵(纯度:99%,美国ROE公司,货号:F61240500、I1161140133、21E6613、21D5452);甲基叔丁基醚(纯度:99%,美国Tedia公司);脂质内标lyso PE(17∶1)、PE(17∶0/17∶0)(纯度:99%,美国Avanti Polar Lipids公司,货号:LM171LPE-11、LM170PE-19);羟脯氨酸ELISA试剂盒(江苏华美生物技术有限公司,货号:CSB-E08839);IL-6、TNF-α ELISA试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号:H007-1-2、H052-1-2);Gibco胎牛血清(美国Thermo Fisher公司,货号:10099-141);DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶(含0.1%EDTA)、青霉素-链霉素混合液(100×)、磷酸缓冲液(上海源培生物科技有限公司) ......