邢烨锋,赵武霞,欧志杰,张天艾,胡玥

    (1.南通市通州区中医院检验科,江苏 南通 226300;2.南京中医药大学中医学院·中西医结合学院,江苏 南京 210023;3.常熟市中医院神经内科,江苏 常熟 215516)

    缺血性中风约占所有中风的80%,是一种高发病率和高死亡率的脑血管疾病[1]。研究发现,脑缺血后小胶质细胞迅速增殖活化,参与脑缺血再灌注损伤的病理过程[2-3],对缺血后损伤发挥修复和加剧的双重作用[4]。P2Y12受体是一种仅限于中枢神经系统小胶质细胞代谢的嘌呤受体[5],与神经病理和炎症相关[6]。此外,激活的GTP-RhoA/ROCK2信号通路和提高的磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平促进炎症损伤,在抑制P2Y12受体后可得到改善[6]。清代名医王清任《医林改错》中的补阳还五汤在缺血性脑卒中的临床防治中被广泛运用[7]。现代药理研究发现,补阳还五汤可促进小胶质细胞抗炎介质的分泌,通过减轻炎症反应以减轻脑损伤[8-9]。然而,补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤小鼠P2Y12受体介导的RhoA/ROCK信号通路的影响尚未见报道。因此,本研究拟通过构建脑缺血再灌注损伤小鼠模型,探讨补阳还五汤对小胶质细胞的极化以及P2Y12受体介导的RhoA/ROCK炎症信号通路的影响。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    健康C57BL/6J小鼠(SPF级)60只,雄性,6～8周龄,18～22 g,购自江苏集萃药康生物科技有限公司。实验动物许可证号:SYXK(苏)2018-0049。分笼饲养条件:自由进食、饮水,12 h光照和12 h黑暗交替循环,温度23～25 ℃,湿度40%～60%,适应性饲养1周后进行实验。本研究经南京中医药大学动物保护与伦理委员会批准(伦理编号:A21065),动物的饲养条件和实验程序均严格遵守实验动物管理委员会和伦理道德委员会规章制度。

    1.2 补阳还五汤溶液制备方法

    补阳还五汤由君药黄芪120 g,臣药当归6 g以及佐药赤芍4.5 g,川芎3 g,桃仁3 g,红花3 g,地龙3 g组成(生产批号:20220201,安徽桐化堂中药饮片科技有限公司),符合《中华人民共和国药典》2020版规定。取上述各味中药饮片混合加水浸泡1 h,水煎40 min后取药液,药渣同法再次煎煮,合并后浓缩为含生药2 g·mL-1的补阳还五汤水溶液,-20 ℃保存备用。

    1.3 仪器与试剂

    纯水仪(型号:Milli-Q Academic A10,美国Milipore公司);荧光显微镜[型号:IX73,奥林巴斯(中国)有限公司];高速冷冻离心机(型号:Vlicro CL21R,上海宝赛生物科技有限公司);冷冻切片机[型号:6250,达科为(深圳)医疗设备有限公司];化学发光底物(ECL)成像系统(型号:EI600,南京碧云天生物技术有限公司);低温离心机(型号:CENTRIFUGE 5424R,德国Eppendorf公司);实时荧光定量PCR仪(型号:7500,美国ABI公司);显影成像仪(型号:Tanon-4600,上海天能公司) ......