黄思莹, 冯旗园, 包旺林, 黄潇正, 武文星, 赵明,2, 段金廒,2, 刘睿,2

    (1.南京中医药大学/江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心/国家中医药管理局中药资源循环利用重点研究室,江苏 南京 210023;2.动物类中药与功能肽国际合作联合实验室,江苏 南京 210023)

    水牛角(Bubali Cornu)是牛科动物水牛的角,始载于《名医别录》:“疗时气寒热头痛”[1],为我国传统的动物类中药,具有清热凉血,解毒定惊的功效,常用于温病高热、神昏谵语、发斑发疹、吐血衄血、惊风、癫狂等疾病的治疗[1-2]。课题组前期研究表明水牛角含巯基类成分(-SH active fraction, SHF)为重要的功效物质,通过纳米材料、亲和层析等方法制备的水牛角含-SH肽类成分能够显著提高氧化损伤小鼠微脑血管内皮细胞的存活率,并减少炎症损伤小鼠单核巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌,表现出显著的抗炎、抗氧化作用[1]。

    现代研究表明,含-SH或二硫键(-S-S-)类成分具有解热、抗炎、抗氧化等效应,如N-乙酰半胱氨酸(NAC)、谷胱甘肽(GSH)、α-硫辛酸等,与-SH、-S-S-类成分参与机体炎症、氧化应激通路等有关,NAC一方面通过抑制MAPK/NF-κB信号通路发挥抗炎作用,另一方面通过激活Nrf2通路减轻氧化应激[3-4];GSH能够通过激活Nrf2/HO-1信号通路从而降低过氧化氢诱导的细胞毒性和活性氧的产生[5];α-硫辛酸通过抑制NF-κB信号通路,下调IL-6、IL-1β及TNF-α的表达,减轻LPS诱导的炎症模型[6]。

    角蛋白含有丰富的-SH、-S-S-类成分,并具有解热、镇痛、抗惊厥等作用[7],课题组前期采用纳米材料富集、亲和树脂层析等方法制备了水牛角SHF,并从细胞层面评价其抗炎、抗氧化作用[1,3]。然而,这些方法过程繁琐,且富集量为μg或mg级别,仅可实现细胞层面评价其效应,无法确保动物实验及后续深入研究的开展。

    为此,本文采用十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇(SDS-DTT)联合提取法制备了g级别的水牛角SHF,并对其物质基础及-SH水平进行分析表征。采用LPS致大鼠发热模型[8],评价水牛角SHF的解热效应,同时测定了血浆和下丘脑中关键炎症因子的水平,并采用非靶向代谢组学研究水牛角SHF对发热大鼠血浆代谢物的干预情况,以期深入阐明水牛角发挥解热效应的物质基础,为效应机制评价提供科学依据。

    1 材料 ......