编码大鼠血管紧张素转换酶短发夹环RNA质粒的构建与鉴定
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周华 高奋 李茂莲 边云飞 何军华 肖传实 山西医科大学第二医院;
【摘要】目的构建编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体质粒,为利用基因沉默技术从转录后水平进行高血压治疗的研究做准备。方法根据大鼠ACE mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠ACE的shRNA表达载体质粒。结论构建的编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体可进入哺乳动物细胞内表达短发夹RNA,经Dicer酶裂解成si R-NA并降解靶基因mRNA,而达到基因干扰的作用。为利用其进行自发性高血压大鼠的降压治疗研究奠定了基础。
【关键词】 基因干扰 高血压 血管紧张素转换酶 短发夹RNA 载体
【基金】山西省归国留学人员基金资助项目(No.2007005) 山西省研究生优秀创新项目(No.20081050)
【分类号】R346
高血压是充血性心力衰竭、中风、终末期肾病的重要危险因子。据WHO统计,全世界成年人群约有15%~37%患有高血压病,而60岁以上的某些人群,高血压发病率可达50%。预计到2025年,全世界高血压发病人数将升至15.6亿人[1]。目前认为高血压发病的主要病理、生理机制包括交感神经系统和
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摘要：目的 构建编码大鼠ACEmRNA的shRNA真核表达载体质粒，为利用基因沉默技术从转录后水平进行高血压治疗的研究做准备。方法 根据大鼠ACEmRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段，退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1，并进行酶切鉴定和测序。结果 酶切证明构建的shRNA已插入栽体，经测序证明与设计的相同，获得大鼠ACE的shRNA表达栽体质粒。结论 构建的编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体可进入哺乳动物细胞内表达短发夹RNA，经Dicer酶裂解成siRNA并降解靶基因mRNA，而达到基因干扰的作用。为利用其进行自发性高血压大鼠的降压治疗研究奠定了基础。
关键词：基因干扰；高血压；血管紧张素转换酶；短发夹RNA；载体
中图分类号：R392.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2008)12-1433-03
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