杜 艳,韩葆芬,胡晓芸

    纤溶系统的功能下降与血栓性疾病密切相关,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)是纤溶系统的一个重要调节因子,高水平的PAI-1抑制纤溶系统的活性,参与血栓性疾病的发生发展过程。尼古丁作为香烟烟雾中的有害物质之一,不仅可以活化炎性细胞,调控细胞凋亡,而且可以损伤血管内皮,导致内皮细胞功能障碍,是血栓形成的重要危险因素。本研究采用尼古丁干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察尼古丁对PAI-1在蛋白及基因水平表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 试剂 HUVECs细胞株购自上海门谍塔生物科技发展有限公司。尼古丁购自美国Sigma公司;胎牛血清(FBS)购自杭州四季青公司;RPMI-1640培养基、胰蛋白酶均为美国Gibco公司产品。PAI-1酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自上海太阳生物技术公司;PCR引物由上海生工生物工程公司合成;T rizolRNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒均购自北京全式金生物技术有限公司。

    1.2 HUVECs的培养与分组 HUVECs用含10%FBS的RPMI-1640培养液,在 37℃、5%CO2箱中培养,隔日换液 1次,待细胞生长至亚融合状态时用0.25%胰蛋白酶消化液以1∶2传代,接种于25 cm2培养瓶中,倒置显微镜下观察可见细胞呈多角形或“铺路石”样排列,待 HUVECs达80%融合后随机分为对照组与尼古丁组。对照组培养液中不加任何干预;尼古丁组于培养液中加入一定体积的尼古丁,使其终浓度为100 μ mol/L。相同实验条件孵育12 h,收集各组细胞及上清液用于PAI-1mRNA及蛋白的检测。

    1.3 PAI-1蛋白的测定 采用ELISA法对各组细胞上清液进行测定 ......