郭文平,梁新华,焦 炎

    创伤性颅脑损伤作为现实生活中造成人类死亡的主要原因之一,是医学研究的重要课题,对伤后时间的推断也是备受法医学界的关注。细胞核因子(NF-κ B)广泛存在于各类细胞中,在机体感染,创伤后的免疫,炎症及细胞的生长调控过程中发挥着重要的作用,参与多种炎症介质的基因转录调控,且在机体创伤早期即有表达。本研究通过建立大鼠脑挫伤模型,应用免疫组化SABC法,从蛋白分子水平研究大鼠脑挫伤后不同时间NF-κ B表达与损伤经过时间的关系。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物分组 64只健康成年 Wistar大鼠,雌雄不限,体重250 g±10 g,由山西医科大学实验动物中心提供,随机分为实验组(56只)与对照组(8只),实验组根据损伤时间的不同分成7个小组,即挫伤后1 h组、4 h组、12 h组、48 h组、72 h组、7 d组、14 d组,每组 8只。

    1.2 动物模型制备 实验组动物参照Feeney's法建立大鼠脑挫伤模型。大鼠称重后,3%的戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔麻醉,大鼠脑立体定位仪固定大鼠头部,正中切开顶部头皮,在人字缝前方3 mm、颅骨中线旁3 mm处,钻直径5 mm的圆形骨窗。保持硬膜完整,采用自由落体打击装置,以40 g重锤从20 cm高处下落打击。术后动物常规进食饮食。在各分组时间点处死大鼠,4%多聚甲醛心脏灌流后取脑组织。对照组依上述方法钻孔后直接处死后4%多聚甲醛心脏灌流。

    1.3 免疫组织化学染色 将固定好的脑组织用蔗糖PBS液梯度脱水后,用LEICA CM1850超薄切片机在损伤部位范围内作连续冰冻切片(厚度为 5 μ m) ......