陈国蕾,梁新华,焦 炎

    低氧诱导因子(HIF-1)是近年发现的一种重要的缺氧感受因子,由α、β两个亚基组成,其中α既是调节亚基,又是活性亚基。常氧条件下,哺乳动物的中枢神经系统、心 肺、胎盘、骨骼肌和肾等组织内均有HIF-1α的表达,但含量很低,难以检测,但当细胞缺血缺氧时,HIF-1α表达就开始增高,作为转录调节因子,其介导多种效应基因的表达,在缺血缺氧反应过程发挥重要作用[1,2]。本实验旨在通过对脑挫伤后不同时间段HIF-1α的表达进行检测,建立HIF-1α的表达与脑挫伤经过时间的关系,为法医学脑挫伤经过时间的推断提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物分组 健康成年SD大鼠64只(山西医科大学实验动物中心提供),体重(250±10)g,雌雄不限,随机分为8组,分别为对照组和挫伤后1 h组、4 h组、12 h组、48 h组、72 h组、7 d组、14 d组,每组 8只。

    1.2 脑挫伤模型的建立及取材 参照Feeney法建立大鼠闭合性脑挫伤模型。大鼠称重后,3%的戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉,大鼠脑立体定位仪固定大鼠头部,沿正中线切开头顶部皮肤,在人字缝前方3 mm、颅骨中线旁3 mm处,钻直径5 mm的圆形骨窗。保持硬脑膜完整,在硬脑膜上放置垫片,采用自由落体打击装置,以50 g重锤从20 cm高处垂直下落打击一次,缝合皮肤,术后常规进饮食。分别于伤后1 h、4 h、12 h、48 h、72 h、7 d、14 d颈椎脱臼处死动物,开颅,以脑挫伤灶为中心旁开1 mm行大鼠脑冠状切面取材,置于4%多聚甲醛PBS液中固定,对照组动物直接处死,相同部位取材。

    1.3 方法 甲醛中取出组织,常规酒精梯度脱水,石蜡包埋,切片(厚度4 μ m),石蜡切片脱蜡至水,常规行 HE染色,免疫组化SABC法操作步骤参照试剂盒说明书进行,3%H2O2灭活内源性酶,PBS冲洗;微波抗原修复,PBS冲洗;5%小牛血清封闭,一抗稀释度为 1∶100,4℃,过夜,PBS冲洗;二抗37℃,45 min;PBS冲洗;滴加SABC,0.5 h,PBS冲洗;DAB镜下控制显色,水洗,苏木素复染细胞核,脱水,透明,封片 ......