张希廉,田军彪

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 健康成年SD雌性大鼠(许可证号:SCXK冀2003-1-003)60只,体重(200±20)g,由河北医科大学实验动物中心提供。

    1.2 主要实验仪器 SR-6N型大鼠脑立体定位仪(日本),BP211D型微量天平(中国),LDZ5-2型低速自动平衡离心机(中国),5 μ L微量进样器(上海),OLYMPUS CH2O型显微镜(德国),Leica RM2245型石蜡切片机(德国),图像分析系统(美国)。

    1.3 主要药物和试剂 美多巴:瑞士巴塞尔豪夫迈罗氏有限公司;6-OHDA、阿扑吗啡(APO):Sigma公司;中药抗颤宁8剂:河北医科大学中医院制剂室制备;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、NO测试盒:南京建成生物工程研究所;一抗T H抗体(1∶100):美国SANTA CRUZ 公司;二抗IgG(1∶200):河北博海生物工程有限公司。

    1.4 实验方法

    1.4.1 中药煎取 龟板15 g,白芍20 g,黄芪15 g,当归12 g,鸡血藤15 g,天麻15 g,川朴15 g,云苓 12 g,川芎 6 g,炙甘草9 g,水煎2次,将两煎液混合浓缩成每 1 mL含生药3.35 g的水煎液,分装,密封,冷藏保存。

    1.4.2 动物分组 全部大鼠均进行行为检测,确认无震颤、运动减少、肢体僵硬、竖毛、竖尾等行为后,每笼5只喂养(室温 22℃,湿度45%)。1周后随机选出8只作为假手术组;其余造模,造模成功大鼠根据随机数字表随机分成模型组、中药组、西药组各8只。

    1.4.3 模型制备 取SD大鼠,用10%水合氯醛给予大鼠腹腔注射麻醉后,固定于脑立体定位仪上,剪去头部头发,在常规消毒下,于头颅正中切开头皮和皮下组织,确定前囟坐标,参照文献[1]大鼠脑立体定位图谱,确定右侧黑质两坐标为:①前囟尾侧4.4 mm,矢状缝右侧1.2 mm,硬膜下7.8 mm;②前囟尾侧4.8 mm,矢状缝右侧1.0 mm,硬膜下7.8 mm。计算出注射点的相对坐标,进行标记定位后,牙科钻在相应部位钻透颅骨,勿损伤硬脑膜。用5 μ L微量进样器吸取6-OHDA 4μL(浓度为4 μ g/μL),每孔 2 μ L,缓 慢进针至预定深度,以 1 μ L/min 的速度注入,注射完毕后留针10 min,以1 mm/min的速度缓慢退出,缝合皮肤。术后前3 d腹腔注射青霉素钠2×105U,以预防感染。

    1.4.4 行为学检测 术后第14天进行行为学检测,给受试大鼠腹腔注射APO 0.5 mg/kg,以诱发大鼠向左侧单向旋转,并记录旋转开始时间、结束时间和旋转圈数 ......