田 金,王 雄

    心肌缺血再灌注损伤是临床上常见的病理生理过程,其机制与炎症因子的产生有关,寻找能有效减少炎性因子水平的药物,已成为缺血再灌注药物研究的重要方面。腺苷作为机体一种重要的内源性活性物质,其心脏保护作用成为近几年研究的热点[1-3],腺苷预处理可抑制缺血再灌注后的炎性反应[4]。本研究拟进一步观察在缺血再灌注后给药对大鼠心肌细胞核因子κ B(NF-κ B)及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,以明确腺苷后处理是否和缺血预适应同样具有保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 动物模型制备 雄性清洁级Wistar大鼠(由山西医科大学实验动物中心提供),体重(220～250)g,经20%乌拉坦(5 ml/kg)腹腔麻醉,以针形电极插四肢皮下,观察记录标准Ⅱ导联心电图。以小动物呼吸机行机械通气。开胸暴露心脏,在左冠状动脉前降支距左心耳下缘2 mm处穿过丝线,提起后以套管夹闭造成冠状动脉阻塞。心肌缺血依据心电图ST段抬高确认;再灌注依据ST段恢复确认。手术结束后输入液体,控制30 min后开始实验。

    1.2 动物分组及处理 32只大鼠随机分为4组,每组8只。假手术组:开胸只穿线不结扎血管,麻醉维持150 min;缺血再灌注组(I/R):结扎 LAD 30 min,再灌注 120 min;缺血后处理组:缺血30 min,再灌注30 s停止灌注30 s,重复 3次,再灌注120 min;腺苷组:结扎 LAD 30 min后,股静脉缓慢滴注腺苷305 μ g/(kg?min),持续 5 min,再灌注 120 min。

    1.3 光镜观察 各组切取相同部位心尖部心肌组织,光镜下观察心肌结构变化。

    1.4 心肌组织NF-κ B的活化及免疫组化检测 按非生物素二步法免疫组化染色试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)说明书操作,取石蜡切片按程序脱蜡,3%(v/v)H2O2灭活内源性酶,微波抗原修复,以 1∶100的兔抗大鼠NF-κ B65多克隆抗体为一抗,山羊抗兔IgG为二抗,加酶标记物,DAB显色,光镜下观察 ......