第五永长,辛馥伶,李 敏,赵 娜,苗迎春,时 晶

    阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种以进行性记忆认知损害和智能障碍为主的中枢神经系统退行性疾病。目前公认的AD核心病理特征为大脑局部,尤其是海马和皮层神经元退行性病变,细胞内神经原纤维缠结(NFT)和细胞外老年斑(SP)沉积。然而,AD的病因和确切发病机制目前仍不清楚。葡萄糖代谢紊乱和能量生成减少与淀粉样蛋白沉积以及tau蛋白过度磷酸化密切相关,可能促进了AD的发生。链脲佐菌表(STZ)侧脑室注射已被证实可以引起大鼠脑持久的葡萄糖代谢紊乱、能量生成障碍伴海马乙酰胆碱转移酶活性降低和氧化应激反应以及学习记忆障碍[1],然而其与AD病理改变的联系未得到进一步实验证实。本实验进一步观察了STZ侧脑室注射对大鼠学习记忆及海马组织tau蛋白AD特异性磷酸化位点Ser422的磷酸化程度的影响。

    1 材料与方法

    1.1 动物及分组 SPF级健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只,体重(250±20)g。随机分成假手术组、STZ侧脑室注射模型组,每组18只。实验过程中动物自由摄食和饮水(术前禁食除外),室温22℃ ～ 26℃,湿度为28%～30%。

    1.2 药品与试剂 链脲佐菌素:Sigma公司;抗体:pS214(western blot检测及免疫组化检测的一抗分别购自Biosource和Abcam公司)。

    1.3 ICV-STZ拟 AD模型制备 参考 Sharma等[2]方法,所有大鼠经10%水合氯醛(4 mL/kg)麻醉后,固定于江湾Ⅰ型C大鼠立体定位仪上,常规消毒皮肤,正中矢状切口,分离骨膜,锥颅器钻开颅骨,暴露硬脑膜。除假手术组外,其余动物均用微量注射器每侧侧脑室各注射 STZ约 18 μ L(3 mg/kg,注射前将STZ溶于人工脑脊液,浓度为25 mg/mL)。坐标参考《大鼠脑立体定向图谱》[3]:前囟后1.5 mm,矢状缝左右旁开1.5 mm,脑表面下3.5 mm。第3天重复注射,剂量同前。假手术组以等量人工脑脊液替代STZ。术后常规饲养21 d后行为学测试并处理第一批,31 d后行为学测试并处理第二批动物。

    1.4 学习记忆能力测试 采用Morris水迷宫试验法 ......