张爱平,杨锦艳,王 丽,杨 红,郑茂东

    川芎嗪(TMP)是从植物川芎根茎中提取分离得到的生物碱单体,具有活血化瘀,抑制血小板聚集、钙通道阻滞和血栓素的合成,降低血浆内皮素水平等作用,对缺血性脑血管疾病具有良好的疗效[1]。

    人血清白蛋白(HSA)是血液中的主要蛋白[2]。研究中药分子与蛋白质[3]的结合机制有利于深入了解中药的药效。国内外有关天然药物分子特别是中药有效成分与蛋白的相互作用研究领域尚处于起步阶段且目前的研究工作主要集中在药物-蛋白质二元体系,而有关金属离子对药物-蛋白质二元体系的影响的研究较少,研究内容系统性不够,更深层次的规律尚未得到揭示。因此,开展中药分子-蛋白质多元体系的研究具有重要意义。

    采用紫外光谱法、荧光光谱法和同步荧光光谱法相结合的分析方法,在模拟人体生理条件下,研究TMP与HSA的相互作用,并探讨共存金属离子对TMP与HSA相互作用的影响,为揭示TMP作用机制提供实验数据和理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 仪器和试剂 Cary Eclipse荧光光度计(Peltier电子恒温装置,美国瓦里安公司);TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);Biohit加样器(芬兰百得公司);pHS-3C数字酸度计(上海雷磁仪器厂);HSA(美国Sigma公司);磷酸川芎嗪(中国药品生物制品检定所);MgCl2、CoCl2、CuCl2、ZnCl2均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。

    1.2 实验方法 配制0.02 mol/L的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液(pH7.40,内含0.15 mol/L NaCl),然后分别用该缓冲溶液配制1.79×10-4mol/L HSA溶液和5.80×10-4mol/L的TM P溶液。

    1.2.1 紫外光谱的测定 固定HSA溶液的浓度,逐渐增加TMP溶液的浓度,在TU-1901紫外分光光度计上记录200 nm～500nm波长范围内紫外光谱。

    1.2.2 荧光光谱的测定 移取2.0 mL 1.79×10-6mol/L HSA溶液于1 cm石英池中,用可调式移液器逐次加入TMP溶液进行荧光滴定,混合均匀后,以280 nm为激发波长,在Cary Eclipse荧光光度计上记录290 nm～500 nm波长范围内的发射光谱 ......