赵然尊,石 蓓,郭 艳,许官学,王冬梅,沈长银

    再狭窄是临床冠心病介入治疗后较严重的远期并发症。基础研究发现,再狭窄的病理机制包括早期内皮细胞损伤、血管弹性回缩和平滑肌细胞的迁移与增殖、新生内膜增生及晚期血管重塑。现阶段药物洗脱支架治疗可明显抑制平滑肌细胞增殖和新生内膜的增生,降低了再狭窄发生率;然而,支架植入术可引起不同程度的血管壁损伤,并因此加重局部炎症反应而导致更严重的内皮功能障碍和新生内膜增生等病理损伤修复反应。近年研究表明,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有促进损伤动脉内皮修复和抑制新生内膜增生的作用[1]。但正常个体外周血循环中MSCs含量极少,动脉损伤后其上述作用效应较弱,不足以阻断再狭窄的发生。本研究在建立兔颈动脉粥样硬化狭窄基础上行球囊损伤,经静脉移植自体间充质干细胞,观察其对粥样硬化颈动脉球囊损伤后再内皮化和内膜增生的影响。

    1 材料与方法

    1.1 颈动脉粥样硬化模型制备 选用健康纯种大白兔为研究对象,体重2.0 kg±0.5 kg,雌雄不限(均购自第三军医大学动物中心)。大白兔采用经高脂饮食喂养2个月后,制作颈动脉粥样硬化模型,具体制作步骤:以25%乌拉坦1 g/kg耳缘静脉麻醉。无菌条件下,于兔颈前正中皮肤切开3 cm～4 cm的纵切口,充分分离显露右颈外动脉,将右颈外动脉固定于自制的有机玻璃血管槽中,动脉两端以橡皮筋拉紧阻断血流。10 mL注射器内装生理盐水,接4.5号头皮针,平行于血管纵轴方向穿刺阻断血管的一端进入血管内,充盈血管。另一端用4.5号头皮针穿刺进入血管,生理盐水冲洗置换处血管腔内的血液后,空气置换出血管内生理盐水。接上流量150mL/min的医用氮气气流,历时15 min造成内皮干燥,内膜损伤。然后生理盐水置换出血管腔内的气体,放开动脉两端橡皮筋恢复血流,压迫穿刺点4 min～5 min止血,缝合皮下组织和皮肤并包扎。总计完成48只动物模型,随机分为两组,MSCs移植组(n=30)即于球囊损伤后即刻、1周和2周时给予MSCs经耳缘静脉移植;对照组(n=18)于球囊损伤后相同时间点给予等量生理盐水注射。

    1.2 MSCs来源与体外培养 MSCs移植组所有动物于球囊损伤前1个月皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF,商品名:赛强,长春金赛药业有限责任公司生产)25 μ g/kg,连续 5 d后,然后采集外周血2次～3次,采用密度梯度离心法并贴壁培养法,分离培养获得MSCs,经流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,一般认为,MSCs均一表达CD44阳性,而 CD34、CD45阴性(USBiological公司,USA),且要求纯度达95%以上 ......