赵晋枫,王 丹,李灵敏,刘乃红,张 策

    阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)即老年性痴呆是以进行性记忆和认知功能丧失为临床特征的大脑退行性疾病[1],神经细胞外以β淀粉样蛋白(Aβ)沉积为核心形成老年斑(senile plaques,SP),神经细胞内以异常过度磷酸化的tau蛋白为核心形成神经元纤维缠结(neurofibrillarytangle,NFTs),tau蛋白是一种微管相关蛋白主要存在于轴突内,它的主要功能是促进微管的形成和保持微管的稳定性[2]。研究表明,tau蛋白磷酸化程度是体内多种蛋白激酶的磷酸化和蛋白磷酸酶的去磷酸化两种作用平衡的结果,其中,PP2A是脑内调节tau蛋白去磷酸化主要的磷酸酶。冈田酸(okadaic acid,OA)是一种海洋生物提取物,对蛋白磷酸酶2A(PP2A)有特异性抑制作用[3],研究证实,OA能特异性降低PP2A活性引起神经元微管相关蛋白tau异常过度磷酸化[4,5],继而引起神经元毒性。

    1 材料与方法

    1.1 皮层神经元的培养 选用新生3 d以内的Wister大鼠(山西医科大学动物管理中心提供),乙醚麻醉后,常规消毒,打开颅骨,取出两侧大脑半球,置于D-Hank's液中。剥除脑膜,分离出大脑皮层组织。将皮层组织锐性切割成1 mm3大小,转移至离心管,加入0.125%的胰酶,小心吹打后静置2 min,吸出并收集上清液,用D-Hank's液重悬沉淀的组织,再次吹打,直至均形成单细胞悬液。1 000 r/min离心5 min,弃上清液。加入全培液,吹打均匀。将细胞悬液转移至预先铺有多聚赖氨酸的培养板上(M TT测定是细胞培养在96孔板上),置 37℃,5%CO2培养箱中贴壁培养。细胞贴壁3 d后,依据细胞生长情况,按每毫升培养液加入6 μ L10 μ mol/L的阿糖胞苷作用 24 h～48 h,以抑制胶质细胞的生长,使神经元得以纯化 ......