刘文立,张生林

    脑出血是急性脑血管疾病的危重类型,其发生率、致残率和病死率均较高。脑出血后脑水肿形成是脑出血的重要并发症,也是临床脑出血病人病情加重和死亡的主要原因之一,但脑出血后脑水肿形成的病理机制至今尚未完全阐明。内皮素(endothelin,ET)和一氧化氮(nitric oxide,NO)是近年来发现的血管活性物质,两者在脑血流调节中起重要作用[1]。本实验旨在通过建立大鼠脑出血模型,观察脑出血后血肿周围脑组织含水量与ET、NO含量之间的关系,探讨ET、NO在脑出血后脑水肿形成中的作用,为临床治疗提供新的理论依据和方法。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 选用健康雄性SD大鼠48只,体重250 g～300 g,由山西医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为脑出血组和假手术对照组,每组24只,两组动物再随机分为术后1 d,3 d,5,7 d 4个时间点,每个时间点6只,分别用于测定脑组织含水量与ET、NO含量。

    1.2 动物模型制备 采用Rosenberg等报道的方法,将大鼠用20%乌拉坦(0.35 mg/100 g)腹腔注射麻醉,固定于立体定向仪(江湾I型)上。头皮下正中切口约1.0 cm,于颅骨背侧前囟后1.0 mm,右侧旁开3.0 mm处钻孔,用微量注射器沿钻孔垂直进针约5.8 mm。脑出血组在右侧尾状核注射溶有Ⅶ型胶原酶(0.5 U/2 μ L)的生理盐水2μL,2 min内注射完毕,留针5 min。Ⅶ型胶原酶由美国Sigma公司提供。对照组在右侧尾状核注入2 μ L生理盐水,然后缝合头皮。术后观察神经系统症状,大鼠出现病灶对侧偏瘫、行走时有不同程度的旋转、患侧前肢内收及后肢外展,视为模型成功[2]。

    1.3 脑组织样本的采取 按各组预定时间过量麻醉处死大鼠,开颅取脑。脑出血组将脑血肿所在的右侧大脑沿血肿正中冠状切面切开,取血肿前部脑组织200 mg做脑含水量测定,取血肿后内脑组织约200 mg测定NO含量,取血肿后外脑组织约100 mg测定ET含量。对照组取右侧大脑按上述方法进行操作。

    1.4 脑组织含水量的测定 用干湿重法测定脑组织含水量。脑组织含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%[3]。

    1.5 脑组织ET含量的测定 采用放射免疫分析法测定ET,试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免研究所 ......