杨 帆,张 洪,许 旌,刘莹露

    阿尔茨海默病(AD)是一种中枢胆碱能神经系统退行性疾病,目前确切病因尚不清楚,但β淀粉样肽诱导的乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱转移酶(ChAT)的活性改变及神经细胞凋亡的病理机制被广泛接受。乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEIs)通过抑制AchE的活性,恢复乙酰胆碱(Ach)的正常水平,提高胆碱能神经元的兴奋性,从理论和临床均已证明是有效的。而可减少神经元凋亡的中药制剂脑灵汤[1]及葛根素[2]已证明能显著改善AD大鼠的学习及记忆能力。本实验通过检测血清及脑组织中AchE及ChAT活性以及对海马神经元凋亡形态、调控蛋白的观察,探讨补肾健脾方对阿尔茨海默病的治疗机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 健康清洁级SD雄性大鼠60只,3月龄～4月龄,体重250 g～300 g。由南京大学医学院动物实验中心提供。饲养条件:清洁级,室内温度18℃～22℃,相对湿度 50%～70%,自由摄取水、食物。购入后适应性饲养1周后进行实验。1.1.2 药物 补肾健脾复方制剂的主要成分是薏苡仁、淫羊藿等。采用不含赋形剂的浸膏,由江苏省中医院制剂室制备,批号20060721,每毫升含原药0.9 g,药物4℃保存。

    1.1.3 主要试剂和仪器 乙酰胆碱酯酶、胆碱转移酶的测定试剂盒及双缩脲蛋白测定试剂盒购自南京生兴生物公司,UV-722紫外分光光度计购自上海第三分析仪器厂,80-1型离心沉淀机由上海手术器械厂提供。

    1.2 方法

    1.2.1 阿尔茨海默病模型的制备 腹腔注射氯胺酮25 mg/kg麻醉大鼠后,固定头颅,以前囟为基点,后移 0.5 mm,旁开 2.8 mm,以牙科钻钻开颅骨,双侧各注射鹅膏蕈氨酸(IBO)1 μ L(每侧注射时间5 min,留针5 min)。假手术组同样方法注射同体积生理盐水。

    1.2.2 分组及给药 注射IBO后存活大鼠共27只,随机分为模型组、补肾健脾复方制剂小剂量组(小剂量组)、补肾健脾复方制剂大剂量干预组(大剂量组)。假手术组9只大鼠全部存活,正常组预留大鼠8只。大剂量组灌服药物浓度为7.2 g/(kg?d),小剂量组灌服药物浓度为3.6 g/(kg?d),假手术组、模型组及正常组灌服同体积生理盐水,连续4周 ......