丁亚芳,宫丽鸿,高 峰,刘 丹,高冬梅,杜玉杰

    动脉粥样硬化(atheroscierosis,AS)是心脑血管疾病的重要病理基础,也是临床心脑血管疾病发生和引起死亡的主要原因。AS是一种特殊的慢性炎症过程,这种炎症过程源于血浆脂蛋白、各种细胞组分与动脉壁细胞外基质间的相互作用[1,2]。近年来患病人群有逐步年轻化趋势[3],严重危害人类身体健康。因此,研究内皮细胞功能及代谢的变化对探讨AS发病机制具有重要意义。血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)可导致内皮细胞损伤,诱发血管炎症反应。本实验旨在研究搜风祛痰法

    对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞(EC)核转录因子(NF-κ B)mRNA及内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响来预防AS的发生,并为治疗AS提供一定的理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 药物 活心汤组方:全蝎 15 g,蜈蚣2条,地龙20 g,陈皮15 g,半夏15 g,白术15 g,水蛭 15 g。由辽宁中医药大学附属医院中药局提供,加工制成含生药2 g/mL中药浓缩液4℃冰箱保存备用。

    1.2 动物 健康新西兰大耳白兔(辽宁中医药大学动物实验中心)清洁级,雌雄不拘,体重2.0 kg～2.5 kg。

    1.3 仪器 高速冷冻离心机(Sigma 3C15K美国);超净工作台(苏州净化公司);CO2恒温培养箱(THEROM HERAce11150);倒置显微镜(OLYMPUS IX71);PCR仪(Biometra UnioⅡ型,德国);紫外分光光度计(UV-3000,英国);凝胶自动成像及分析系统(Chemi Imager 5500,美国)。

    1.4 试剂 AngⅡ(美国Sigma公司);胰蛋白酶(Gibco公司);DMEM(美国gibco公司);PCR引物(北京华大基因公司合成);胎牛血清(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)。

    1.5 药物血清制备 随机将兔分为4组,空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组5只。后3组分别灌胃活心汤,以人临床用量×动物等效计量比值×血清稀释度为参考给药量,空白对照组给等容积的蒸馏水。连续5 d,第5天灌胃后2 h颈动脉放血,分离血清,56℃30 min灭活,低温干燥,置-80℃保存备用,临用时用DM EM培养液配成10 mg/mL的浓度,再用0.22 μ m 的微孔滤膜过滤除菌 ......