马国英,杨小荣,赵 欣,赵晋枫,秦华平,史瑞红,张 策

    链脲佐菌素(STZ)是一种烷基化物,脑室注射STZ可以导致正常大鼠出现阿尔茨海默病(AD)样的病理退行性变化,如线粒体功能异常、神经元死亡、学习记忆与认知的障碍等[1]。在离体神经细胞培养中可以引起细胞活力的下降,活细胞数目的减少,乳酸脱氢酶(LDH)的释放增加。其机制可能是削弱或破坏胰岛素的信号转导,破坏胰岛素受体的自身磷酸化和内在酪氨酸激酶活性,增加磷酸化酪氨酸磷酸酶的活性[1]。导致胰岛素信号传导障碍,引起葡萄糖代谢紊乱和能量生成受阻。

    Humanin(HN)是在AD病人大脑内发现的由24个氨基酸组成的线性多肽[2],能够有效抑制多种 FAD(Family Alzheimer’s disease)基因突变和 Aβ衍生物诱发的神经毒作用,初始被认为是 AD特异性或AD相关毒性的神经保护肽。抑制APP、PS1、PS2突变诱发的神经元死亡,拮抗Aβ完整肽链以及Aβ片断诱导的神经毒作用[3]。HN的作用机制还不清楚,但随着科学研究的逐步深入研究发现,HN可以拮抗NMDA所致的兴奋毒[4],拮抗缺氧所致的皮层神经元损伤[5],拮抗OA通过诱导tau蛋白过度磷酸化所致的神经毒[6]。提示HN具有广泛的神经保护作用,我们前期实验已经证实STZ对离体培养的神经细胞有损伤作用,本实验旨在探讨HN是否对STZ的神经损伤有保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物和试剂 神经细胞培养应用新生1 d～3 d的Wistar大鼠,雌雄不限。STZ、Calcein-AM 购于Sigma公司,HN由上海生工合成胎牛血清(FBS)购于杭州四季青公司,将STZ溶于D-Hanks溶液中,配成 10 mmol/L的母液,由于STZ溶液的半衰期在生理pH值条件下为19 min[7],需要溶解后立即使用 ......