前列地尔对缺血大鼠脑细胞的保护作用
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摘要：目的 探讨前列地尔(PGE【sub】1【/sub】)对缺血大鼠CGRP的影响，阐明其对脑血管内皮细胞的保护作用。方法 120只大鼠随机分为正常组、模型组及PGE【sub】1【/sub】低、中、高剂量组。PGE【sub】1【/sub】腹腔注射3 d，大鼠MCAO模型24 h后取血，并断头取脑。检测各组降钙素基因相关肽(CGRP)数值进行组间比较。结果 PGE【sub】1【/sub】干预后CGRP较单纯缺血组明显增高(P<0.01)，而PGE【sub】1【/sub】各剂量组间无统计学意义(P>0.05)。结论 PGE【sub】1【/sub】对脑缺血产生明显抑制作用。
关键词:前列地尔；脑缺血；脑保护
中图分类号：R743 R255.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)06-0709-02目前前列地尔(PGE【sub】1【/sub】)保护内皮功能作用的研究多集中于肝脏病【sup】[1]【/sup】及糖尿病【sup】[2]【/sup】治疗方面。推测前列地尔对于缺血性脑血管疾病、血管性痴呆及周围血管病的疗效中包含有保护内皮功能的机制,据此本研究复制了大鼠缺血性脑血管疾病模型,旨在观察前列地尔在治疗缺血性脑血管疾病作用中的可能机制。
1 资料与方法
1.1 实验动物 选用健康雄性SD大鼠120只，体重200 g～250 g，辽宁医学院实验动物中心提供。
1.2 实验试剂 前列地尔脂肪乳剂(Lipo PGE【sub】1【/sub】,商品名凯时,98 卫药准X262号,北京泰德制药有限公司提供)降钙素基因相关肽(CGRP)试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供；生物素化二抗、辣根过氧化物酶标记链亲素、DAB浓缩显色液、DAB稀释液，均由武汉博士德生物工程有限公司提供。
1.3 方法
1.3.1 实验分组 遵循随机原则，大鼠按顺序编号，分为假手术组、单纯缺血组及PGE【sub】1【/sub】低剂量(1.25 μg/kg)、中剂量(2.5 μg/kg)、高剂量(5.0 μg/kg)组。前列地尔各剂量组在MCAO术前3 d腹腔注射每天1次，并于术前1 h再次腹腔注射1次。
1.3.2 免疫生化检测 CGRP测定：MCAO术后24 h取实验组及对照组大鼠12只断头取右侧大脑半球，称重。用生理盐水作匀浆介质，按1 g∶10 mL比例在冰水溶液中用匀浆机充分匀浆，以4 ℃ 3 000 r/min离心15 min后取上清液，即制成10%的脑组织匀浆。标本收集完毕,采用放射免疫方法,按试剂盒说明书操作测定各组大鼠血浆CGRP含量。
1.3.3 病理形态学观察 术后24 h灌注内固定液(2%多聚甲醛,2.5%戊二醛,0.1 mmol pH 7.4 PBS) 约50 mL进行内固定。后立即取出大脑置2.5%戊二醛磷酸缓冲液中固定。取大脑半球,取海马切成1 mm【sup】3【/sup】的小块，以3%戊二醛磷酸缓冲液再固定2 h,1%锇酸后固定1 h,梯度丙酮脱水,Epon2812 环氧树脂包埋,在定位海马CA1区后,用LKB2 Ⅲ型(瑞典) 超薄切片机切片,切片厚度为50 nm,经醋酸双氧铀2柠檬酸铅电子染色后,以日立2600 型透射电镜观察阳性细胞数(棕色)。
1.4 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。数据用均数±标准差(x±s)表示，多组间显著性检验采用单因素方差分析，两组间差异采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组MCAO24 h 后大鼠脑CGRP免疫生化检测值比较(见表1)
表1 各组MCAO24 h 后大鼠脑CGRP免疫生化检测值(x±s)
2.2 病理形态学指标观察 观察大鼠皮层区及海马区组织病理学改变及计数存活神经细胞。假手术组神经细胞形态基本正常未见明显的病理改变。单纯缺血组可见于梗死灶中心可见脑组织疏松，神经细胞数及毛细血管数明显减少，退变的神经细胞多数显示出凋亡的形态学特征：胞浆浓缩，核质凝集、胞浆透亮区加大，病理损伤较假手术组明显。光镜下观察每个视野存活的神经元细胞数目显著减少；与单纯缺血组比较，PGE【sub】1【/sub】低、中、高剂量大鼠脑组织病理学改变较单纯缺血组减轻，每个高倍镜视野存活的神经元细胞数目显著增多，神经细胞浓缩和肿胀程度减轻。假手术组皮层区神经细胞计数为(180.56±8.58)个/高倍视野，单纯缺血组阳性细胞数较假手术组显著减少(P<0.05或P<0.01)；与单纯缺血组比较，PGE【sub】1【/sub】低、中、高剂量组阳性细胞数显著增多(P<0.05或P<0.01)。但前列地尔低、中、高剂量组间比较差异不明显(P>0.05)。详见表2。
表2 各组MCAO24 h 后大鼠阳性细胞数比较(x±s)
3 讨 论
前列地尔是人体内多种细胞能够合成并广泛存在的一种生物活性物质,具有扩血管、抗血小板、抗炎等多种生物活性【sup】[3]【/sup】。本研究在成功复制脑缺血模型基础上,观察了前列地尔短期干预对于脑缺血的影响。结果表明前列地尔干预3 d后,对脑缺血产生了明显的抑制作用,有效地抑制了脑缺血的进一步发展、恶化。脑血管周围分布富含CGRP的神经元和神经纤维，CGRP是目前最强的血管扩张剂之一，它能显著增加脑缺血后脑血流,减少缺血性脑损伤的范围，特别对海马细胞缺氧性损伤具有明显的保护作用,提高复氧后脑功能的恢复率。它对脑细胞缺氧损伤的直接保护作用与其能够维持细胞内钙离子稳态有关 ......
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