范泽卫，阴怀清

    缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)是由于各种围生期窒息导致胎儿或新生儿脑缺氧缺血性损伤，临床出现一系列脑病的表现，是我国伤残儿童致残重要的原因之一。目前国际上无公认有效方法，低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是调节氧稳态平衡的主要调节因子，具有神经保护作用。寻找能够增加内源性HIF-1α表达的药物对治疗缺氧缺血性脑损伤(HIBD)有很大的意义。本实验通过建立新生大鼠HIBD模型，观察去铁胺(DFO)对HIBD后新生大鼠脑组织HIF-1α及Caspase-3表达的影响，探讨HIF-1α的作用机制，为临床治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与药品 HIF-1α、活化的半胱天冬氨酸酶3，多克隆抗体(兔抗)、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒均购自武汉博士德公司；去铁胺(得斯芬)诺华制药(NOVARTIS)。

    1.2 动物分组 清洁级，封闭群，新生7日龄 Wistar大鼠120只，体重12g～16g，雌雄不限(由山西医科大学动物实验中心提供)。随机分为假手术组、HIBD组、DFO组，后两者根据处死时间的不同随机分为7个亚组(3h、6h、12h、24h、48h、3d、7 d)，每组8只。假手术组给予麻醉后切开颈部皮肤，不结扎颈总动脉不进行缺氧处理；HIBD组采用经典Rice法[1]制成HIBD动物模型：乙醚吸入麻醉后切开颈部皮肤，结扎左侧颈总动脉，并置于缺氧舱中(含8%氧气和92%氮气)2h，控制氧浓度在(8.0±0.5)%，舱温(37±1)℃；去铁胺组，制成 HIBD动物模型前24h以去铁胺(200mg/kg，溶于生理盐水)单次腹腔内注射。

    1.3 免疫组化标本采集及监测 术后不同时间点断头取脑组织，10%多聚甲醛室温固定24h后沿视交叉和其后4mm处冠切，做石蜡包块蜡块冠状切片，常规脱蜡；3%H2O2室温孵育15 min；枸橼酸缓冲液中高压抗原修复；滴加封闭用正常山羊血清工作液，室温中孵育15min；滴加一抗：兔抗鼠HIF-1α抗体或兔抗大鼠Caspase-3抗体；滴加生物素化二抗：抗兔IgG抗体，37℃烤箱孵育15min，PBS液洗2min×3次；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP) ......