新型卤酚化合物3’，4’-二羟基-3-氯二苯甲酮对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用(1)
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摘要：目的 明确新型卤酚化合物3’,4’二羟基3氯二苯甲酮(LM46)对缺血/再灌注损伤后大鼠心肌的保护作用。方法 利用大鼠心脏局部缺血/再灌注模型，检测LM46处理后大鼠心肌梗死面积和血清酶学指标的变化。结果 在再灌注早期静脉给予LM46能有效减轻心肌缺血/再灌注损伤。表现为梗死面积减小，超氧化物歧化酶(SOD)活力升高，显著降低血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)水平。结论 在5 mg/kg～15 mg/kg剂量范围内，LM46有显著的心肌保护作用。
关键词：3’,4’二羟基3氯二苯甲酮；缺血/再灌注；心肌保护；大鼠
中图分类号：R542.2 R285.5 文献标识码：A 文章编号：16721349(2012)08096703
心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)时迅速产生的活性氧类物质会使血管内皮细胞的完整性遭到破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核DNA被自由基攻击造成氧化伤害，这是MIRI病理过程的重要触发因素[13]。从海藻中提取得到的多种卤酚化合物均表现出很好的抗氧化活性。本课题组以天然来源的卤酚化合物为先导化合物，进行了结构优化和修饰，合成了系列卤酚衍生物，体外活性筛选结果显示，全新结构化合物3’,4’二羟基3氯二苯甲酮(LM46)对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞具保护活性[4，5]。本实验利用在体大鼠MIRI研究LM46可能具有的药物后处理心肌保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料 雄性健康SD大鼠，体重230 g～260 g，由山西医科大学实验动物中心。HX200动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)；RM6240B生物信号采集处理系统，YPJO1型压力换能器(成都医疗仪器厂)。
LM46注射液由本课题组提供，Even’s blue染液购自Sigma公司；2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染液购自AMRESCO公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.2 方法 将实验动物随机分为6组，每组8只。即假手术组、模型组、溶剂对照组及LM46低、中、高剂量组(5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg)。大鼠MIRI建立参照文献[6，7]，记录正常Ⅱ导联心电图(ECG)。在动脉圆锥与左心耳之间冠状动脉左前降支(LAD)处穿线，除假手术组外，其余各组在LAD下拉紧结扎线使硅胶管压迫LAD 造成血流阻断(以ECGⅡ导联ST 段抬高0.1 mV或T波高耸，心肌颜色变为暗红色，作为LAD 结扎成功的标志)。LAD供血区域左心室左前壁缺血40 min 后，松开结扎线，恢复血液LAD 再灌流。假手术组只穿过不结扎。再灌注过程开始1 min内，模型组和假手术组静脉注射生理盐水1 mL/kg，溶剂组静脉注射空白溶剂1 mL/kg作为对照，LM46分别经股静脉推注相应组别实验用药物，再灌注3 h。
1.3 指标检测 测定各组大鼠心脏梗死面积[8]。血清酶学指标检测，TAB法测得血清中MDA含量。LDH、CK活力测定均按照试剂盒说明书规范操作[9]。
1.4 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示。应用SPSS15.0软件组间单因素方差分析。
2 结 果
2.1 不同计量LM46对缺血/再灌注心肌梗死面积的影响(见表1) 危险区面积占左心室面积的百分比(AAR/LV)在各组间无统计学意义，表明在造模过程中，结扎LAD的手法稳定，各组模型的缺血程度大体相当。LM46不同剂量组心肌梗死面积占危险区面积的百分比(AN/AAR)，显著小于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。
2.2 大鼠血清SOD活力及MDA含量的测定(见表2) 各不同给药组血清中SOD活力显著高于模型组和溶剂对照组，MDA含量显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。
2.3 大鼠血清LDH、CK活力测定(见表3) 给药组血清中CK、LDH活力显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。
3 讨 论
本研究结果显示，与模型组相比，在5 mg/kg～15 mg/kg剂量范围内，不同剂量LM46对大鼠MIRI具有明显的保护作用。
脂质过氧化作用及能量代谢异常是导致MIRI的重要因素。心肌缺血时，由于心肌内源性氧自由基清除剂减少。再灌注以后，分子氧再次进入心肌组织中，氧自由基水平继续上升。自由基会使血管内皮细胞的完整性遭破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核中的DNA会被自由基攻击造成氧化伤害，甚至细胞死亡[10,11]。
心肌缺血再灌注损伤后SOD活力下降，氧自由基增多，导致氧自由基氧化不饱和脂肪酸释放的降解产物MDA含量升高，丙二醛可引起大分子物质如蛋白质、脂类等相互交联、聚合，从而破坏了细胞膜的结构和功能，使胞浆酶如CK和LDH释放增加，加速心肌细胞损害程度[12] ......
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