建立三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠模型的体会(2)
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1.4 统计学处理 数据用均数±标准差表示(x±s)，采用单因素方差分析及t检验。
2 结 果
对照组大鼠在刺激后无阳性反应出现。手术组大鼠在结扎术后1 d～8 d，在大鼠术侧面部触须部位出现反复梳理毛发，抚摸、洗脸动作，而对刺激无躲避、搔抓面部、攻击行为等阳性反应出现；术后9 d开始，大鼠出现包括躲避、攻击、搔抓面部等反应，但反应程度较轻；随时间推移，大鼠对刺激的反应程度加重，至术后14 d时反应达高峰，表现为轻微刺激即诱发出强烈的行为反应，出现头的退缩反应、回避行为及反复的摸脸动作。此反应持续到术后28 d。经慢性缩窄术后的大鼠，与对照组大鼠相比，动作迟缓，体重增长减慢，在眶下神经损伤区域出现感觉困扰，异常性疼痛。手术组术后9 d、14 d、21 d、28 d较术前3 d及术后3 d、6 d痛阈值差异有统计学意义(P<0.05)。详见图1。
3 讨 论
三叉神经痛的发病机制仍不甚明了，确切的动物模型难以建立。目前已经成功建立的模型所涉及的部位包括三叉神经末梢、神经干、神经根、神经节及神经核。鉴于对发病机制的阐述主要基于三叉神经痛脱髓鞘改变的病理基础[2]，IONCCI 模型是目前较常用的、较能表达其发病机制的模型方法。
3.1 实验动物的选择 选用大鼠建立模型，是考虑大鼠的神经系统高度发达，遗传基因最接近于人类，且对镇痛药物引起的行为学反应最敏感和易观察。大鼠性别选雄性SD大鼠，笔者曾用雌性SD大鼠做预试验,发现其手术耐受性差,可能与大鼠性别或鼠龄过小有关，故统一选择雄性大鼠。
3.2 手术入路的选择 眶下神经慢性缩窄环术模型，据文献报道该模型手术暴露眶下神经的入路有口内[1]、颧骨下缘入路[3]和眉弓下法[4]，压迫眶下神经的不同部位。本文前述方法为经口内入路。颧骨下缘入路法：大鼠取俯卧位，头部及四肢固定。沿大鼠左颊部颧骨下缘前1/3段(靠近鼻背部)做长约1 cm切口，向触须垫方向顿性分离皮下组织，显露大鼠颧肌下缘。顿性分离肌肉周边筋膜，暴露眶下孔，即可看到从眶下孔走出的眶下神经。眉弓下法：大鼠取俯卧位,头部及四肢固定。做眉弓上弧形切口,显露颅骨额骨和鼻骨,暴露眼眶,沿眶上缘将眶内容物用神经剥离子拨开,暴露位于眶底部内侧的眶下神经,在眶内从近端仔细分离眶下神经至远端的眶下孔。三种不同的入路，笔者预实验时都做过，相比较经口入路术式更简单，眶下神经更容易找到，出血较少，对实验动物的全身影响较小，故选择此种手术方法。
3.3 结扎线的选择 王维等[5]分别用铬制肠线和丝线对大鼠右侧坐骨神经进行松结扎，建立CCI模型，结果铬制肠线制作CCI模型较之丝线制作CCI模型能引起更为明显的痛阈降低。马骋等[6]比较肠线、丝线、PE 管三种材料制备大鼠神经病理性疼痛CCI 模型时发现,均可造成满意的CCI 模型,但肠线造模的效果优于后两者。该模型导致轻度结扎的神经水肿,进而铬肠线嵌压于肿胀的神经而形成慢性束缚性损伤导致部分神经纤维的变性坏死。故本模型选用40铬肠线结扎眶下神经。
3.4 注意SD大鼠的麻醉用量 查阅文献，好多文章建议用10%水合氯醛对大鼠进行腹腔内注射(0.4 mL/kg)麻醉。笔者按照此推荐用量预实验，结果致多只老鼠因麻醉过量死亡。后改为0.3 mL/kg～0.35 mL/kg后，都能取得满意的麻醉效果且无一例死亡。当然动物死亡也可能与其自身的状态或所购药物的浓度有关，但仍建议用10%水合氯醛0.3 mL/kg～0.35 mL/kg行腹腔内注射即可，防止不必要的动物死亡发生。
3.5 造模后行为学改变的原因分析 术后1 d～8 d 出现的对机械性刺激敏感下降可能与有髓鞘轴突变性、Aβ和Aδ纤维受影响、神经冲动不能通过结扎处传导有关。术后两周出现的高反应性可能和中枢突触前或后的结构、化学、物理改变有关。Vos等[7]观察发现造模后动物的痛阈及行为学改变，约12周逐渐恢复。考虑可能与肠线逐渐吸收、压迫减轻以及神经的再生恢复有关。
3.6 该模型的优点及潜在不足 优点是该模型的建立方法为慢性压迫性损伤，从致病机制上与普遍公认的血管压迫学说类似，这样就从致病机制和病理改变两方面模拟了人类疾病。不足：CCI 模型对神经产生的创伤较大；并且由于模型制备过程中缺少量化标准,在不同的操作者手中产生的神经损伤程度可能不同,不同个体对结扎线的反应程度也可能不同,这直接影响到实验结果的稳定性和可靠性。另外铬线也可能对神经有毒性,这些都有待进一步改善。
参考文献:
[1] 丁丽华,于生元.实验性三叉神经痛慢性缩窄环术动物模型建立[J].中国疼痛医学杂志,2004,10(1):1518.
[2] Love S，Coakham HB.Trigeminal neural giapathology and athogenesis [J].Brain,2001,124(12):23492355.
[3] 李娜，李超，樊娟，等.眶下神经结扎后三叉神经节神经元钾电流改变[J].生理学报，2009,61(1):7278.
[4] 周殡,刘玉光,吴承远.建立三叉神经痛动物模型[J].山东医药,2005,45(3):2122.
[5] 王维，冯泽国，马涛，等.铬制肠线与丝线制作CCI模型效果比较[J].军医进修学院学报,2010，31(5):480482 ......
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