朱海燕，聂 波，徐 冰，刘 蓓，吴圣贤，陈立新

    四妙勇安汤是用于治疗下肢动脉闭塞症和脉管炎的传统名方，由于其活血祛瘀、通络止痛的作用与冠心病心绞痛的病因病机相吻合，故在临床亦观察到其可改善冠心病心绞痛患者的临床症状[1]。本课题组前期研究已证实，四妙勇安汤对治疗冠心病不稳定型心绞痛患者临床症状具有较满意的疗效。但因原方中药量过大，给新药开发带来难度。本实验采用对易损斑块稳定性起重要作用的巨噬细胞为研究对象，通过对NF-κB活化和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)分泌的测定，探索四妙勇安汤的有效组分，为药物的下一步研发提供基础实验数据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 小鼠巨噬细胞系(RAW264.7细胞)，中国医学科学院药物研究所，96孔白色底透培养板(Costa)。

    1.2 试剂及耗材 640培养基，小牛血清，LPS(Sigma)，MMP-9 ELISA试剂盒(Jiamay Biotech Co)，水套式CO2细胞培养箱(Sanyo，日本)，Safire2高速多通道连续波长酶标仪(TECAN，奥地利)，Bright-Glo Luciferase荧光素酶检测试剂(Promega)，48孔和96孔培养板(Costar)。

    1.3 样品制备 “四妙勇安汤”提取物共8个。方法：原料药材55%乙醇提取2次，1.5h/次，得到55%乙醇提取液和残渣，55%乙醇提取液浓缩至干，水混悬，上大孔树脂，连续依次采用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇淋洗，分别获得水部位、30%乙醇部位、60%乙醇部位、95%乙醇部位，分别减压浓缩干燥，得到筛选样品2号～5号；残渣用水提2次，1.5h/次，得到水提液，留取部分水提液浓缩至干得到样品1 ......