司沛沛，孙雪菲，杨小荣，张 策

    谷氨酸是中枢神经系统中重要的神经递质，在胚胎期神经发育、脑的兴奋性突触传递、突触可塑性方面发挥了重要作用。但是，谷氨酸过度聚集可引起细胞损伤甚至死亡，称为兴奋性神经毒，兴奋性神经毒模型是最常用、最具毒性、损伤机制最复杂、最具临床意义的一个神经损伤模型，它参与多种神经病理过程，如脑缺血损伤、各种神经退行性疾病等[1，2]。

    沉默信息调节因子1(silent information regulator 1，SIRT1)是哺乳动物中第一个被发现的去乙酰化酶Sirtuin蛋白家族成员，作为一种NAD+依赖的脱乙酰基酶，它与组蛋白乙酰基酶共同维持细胞核的乙酰化平衡。SIRT1以组蛋白和多种非组蛋白作为底物，通过其去乙酰化作用调节基因转录、染色体稳定性和靶蛋白活性，进而参与能量代谢、细胞周期、细胞衰老及肿瘤发生发展等生理病理过程的调节。近年来，有关SIRT1的神经保护作用受到越来越广泛的关注。为进一步验证SIRT1可能具有的广泛的神经保护作用，本研究拟采用NMDA诱导的兴奋性神经毒细胞模型，应用(cell counting Kit-8)CCK-8分析、乳酸脱氢酶(LDH)检测、Western-blot等方法，明确SIRTI高表达在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞，购自上海中国科学院细胞库；胎牛血清购自Gibco公司；NMDA试剂购自sigma公司；CCK-8购自Dojindo；Lipofectamine 2000转染试剂、Opti-MEM无血清培养基购自Invitrogen公司；MEM、F12培养基，Commassie改良增强型蛋白质定量试剂盒购自武汉博士德生物工程公司；质粒提取试剂盒购自全式金生物有限公司；兔抗人SIRT1抗体购自Abcam公司；β-actin山羊抗兔二抗购自中杉金桥；Super ECL Plus超敏发光液购自普利莱基因技术有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 SH-SY5Y培养基为 MEM、F12，含有10%胎牛血清，100U/mL青霉素、100U/mL链霉素。将细胞以1×105的细胞浓度接种于孔板或培养瓶中，培养于37℃，5%CO2条件下 ......