胡志希，胡思远，李 琳，李 杰，凌 智，侯 超

    冠心病(coronary heart disease，CHD)属中医“胸痹”范畴，究其病因有血瘀、痰阻、寒凝、气滞之别，但其基本病机则是“心脉不通”，血瘀证是冠心病中最常见的证型之一[1-3]。如果CHD的发病年龄较轻(男性≤55岁，女性≤65岁)称为早发CHD[4]。研究早发CHD血瘀证与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性的相关关系以及对血管内皮功能的影响，明确早发CHD血瘀证的分子遗传学特征，具有非常重要的意义。

    1 资料与方法

    1.1 诊断标准 符合1979年 WHO缺血性心脏病“心绞痛”、“心肌梗死”诊断标准，以患者临床症状、体征和病史结合心电图改变或冠脉造影(CAG)进行诊断。以男性≤55岁，女性≤65岁患有冠心病者为早发冠心病。

    按照1995年《中华人民共和国中医药行业标准·中医病证诊断标准》的辨证分型标准[5]；1997年《中华人民共和国国家标准·中医临床诊疗术语·证候部分》[6]；2002年国家中医药管理局医政司胸痹急症中国中医药学会内科学会心病专业委员会《中医心病诊断疗效标准与用药规范》[7]。主症：胸闷心痛，痛如针刺；兼症：面色晦暗/口唇青紫/爪甲发青；舌象：舌质紫暗/舌有瘀斑；脉象：细涩/结代。主症1项+次症2项+舌脉1项，为心血瘀阻证。

    1.2 纳入标准 发病时年龄男性≤55岁，女性≤65岁；湖南地区出生；汉族；彼此无血缘关系。

    1.3 排除标准 严重高血压，糖尿病，恶性肿瘤，肝肾疾病、甲状腺病患者。下列各种心脏病：糖尿病性心肌病、甲状腺功能亢进性心脏病、高血压性心脏病、肺源性心脏病、贫血性心脏病、系统性硬皮病性心脏病、风湿性心脏病。

    1.4 研究对象 早发冠心病组选择湖南中医药大学附一院、附二院的住院患者。早发CHD血瘀证组41例，男25例，女16例，年龄(57.21±4.15)岁；早发CHD非血瘀证组45例，男28例，女17例，年龄(58.58±4.09)岁。正常对照组38名，男21名，女17名，年龄(59.71±4.18)岁。经统计分析3组间性别、年龄比较无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

    1.5 临床指标检测 采用南京建成生物工程研究所eNOS试剂盒(硝酸还原酶法)测定eNOS；采用北京普尔伟业生物科技有限公司血浆内皮素(ET)放射免疫药盒(放射免疫分析法)测定。

    1.6 DNA提取 参照《分子克隆实验指南》[8]传统酚抽提法提取血样中的DNA。

    1.7 DNA纯度及浓度的确定 用移液枪吸取DNA溶液5μL至1.5mL EP管 ......