李广强，李宏芬，袁建新，王颖杰

    遗传因素在脑梗死发病中起重要作用。血管紧张素原作为肾素-血管紧张素系统(RAS)唯一的初始反应底物，在脑梗死的发生、发展中起着相当重要的作用。α-内收蛋白是细胞膜阳离子转运系统内收蛋白的一个亚单位，与膜蛋白(如离子通道及离子泵)相互作用，参与细胞信号转导及细胞膜离子转运，尤其与多种Na+转运机制密切相关。本研究采用单核苷酸多态性分析探讨血管紧张素原基因T174M位点和α-内收蛋白基因的多态性与脑梗死的关系，为脑梗死易患者的筛检、识别、预防和诊断治疗提供一定的理论数据。

    1 资料与方法

    1.1 研究对象 选取2007年1月—2009年1月在开滦总医院神经内科住院的首次发病72h内的住院脑梗死患者396例(病例组)，男性286例，女性110例，年龄52岁～78岁(64.69岁±11.58岁)。选取同期健康查体者且结果均正常的360例为对照组，男性242名，女性118名，年龄51岁～75岁(65.59岁±10.90岁)。两组资料性别、年龄匹配，具有可比性。

    1.2 方法

    1.2.1 诊断标准 脑梗死诊断依据1995年全国第四届脑血管病会议制定标准，原发性高血压诊断标准依据1999WHO/ISH高血压处理指南。除外：具有心脏瓣膜、房颤、肿瘤等明显栓子来源的脑栓塞性疾病；既往有脑梗死、脑出血病史；肝肾功能不全、血液系统疾病患者；一个月内有各种炎症病史者。

    1.2.2 DNA提取 用一次性采血器采集空腹静脉血5mL(0.5mmol/L EDTA-K2抗凝)，低渗法分离白细胞，Tris-HCl饱和酚、氯仿-异戊醇法提取DNA，用于检测基因型。

    1.2.3 基因多态性的检测 血管紧张素原基因T174M多态性的检测：AGT基因T174M引物参照Frossard等[1]的设计，上游引 物：5’GATGCGCACAAGGTCCTG3’；下 游 引 物：5’CAGGGTGCTGTCCACACTG GCTCGC3’(上海生工)。PCR反应体系及条件：PCR反应混合液25μL，其中含DNA模板(0.5～1)μg，引物(2pmol/μL)各0.5μL，2×Taq PCR Master-Mix12.5μL，无菌双蒸水9.5μL，混匀后，应用PE-9700扩增仪(美国PE公司)进行PCR反应，预变性94℃4min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸20s，30个循环。扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果：AGT基因T174M PCR扩增产物为303bp的DNA片段 ......