刘建伟，张晓天，张 超，赛景影，王鑫磊，王槐栋，王 放

    血栓性疾病因其较高的发病率及致死率成为严重危害人类健康的疾病之一[1]。中药具有多靶点、多环节，且不良反应小等优势，在预防血栓形成、治疗血栓性疾病等方面具有良好的效果[2-4]。抗栓中药如血栓心脉宁(XXT)具有活血化瘀，扩张血管，抑制血小板聚集，降低血黏度，降低血脂，改善局部和全身血液循环及防治血栓的功效[3]。国内外已出现不少将基因芯片技术应用到中药药理机制研究中的报道[5]。这为抗栓中药的抗栓分子药理机制的研究开辟出了新的发展前景。利用高密度基因芯片检测中药给药前后基因表达谱的差异是开展中药分子药理研究的主要思路。

    本研究观察人脐静脉内皮细胞(HUVEC)给药前后的基因表达谱差异，探索抗栓中药XXT对HUVEC的作用，为抗栓中药的药物研发和国际化应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂及仪器 HUVEC来自吉林大学白求恩医学院病原生物学实验室冻存；血栓心脉宁片购自吉林华康药业股份有限公司，国药准字Z20030145，产品批号：110601；IMDM培养基购自HyClone；总RNA快速提取试剂盒购自BioTeke；NucleoSpin RNA clean-up试剂盒购自 Macherey-Nagel；晶芯?cRNA扩增标记试剂盒购自CapitalBio；35KHuman Genome Array购自CapitalBio；PrimeScript?RRT reagent Kit购自 TaKaRa；SYBR?RPremix Ex Taq TM 购自 TaKaRa；双通道激光扫描仪购自CapitalBio；ABI 7300型荧光定量 PCR仪购自 Applied Biosystems。

    1.2 细胞培养及实验分组 HUVEC细胞用含15%胎牛血清的IMDM培养液在37℃、95%氧、5%二氧化碳条件下培养，待细胞长满瓶底后，采用0.25%胰蛋白酶消化细胞，每2d～3d传代一次。实验分为正常对照组及XXT给药组。正常对照组加入含2%血清的IMDM培养液，XXT给药组给予终浓度为2.5mg/mL XXT的含2%血清IMDM培养液培养24h。

    1.3 总RNA提取 采用总RNA快速提取试剂盒提取正常对照组及XXT给药组HUVEC的总RNA，并进一步采用NucleoSpin?RNA clean-up试剂盒对总RNA进行过柱纯化，最后用紫外分光光度计定量，甲醛变性胶电泳质检。

    1.4 RNA荧光标记与杂交 RNA反转录合成1st-strand cDNA及2nd-strand cDNA ......