杨进平，吴 林，陈 炜，郑福奎，蔡鑫昆，温惠娟，王青碧，毕信亚

    阿尔茨海默病(AD)又称老年性痴呆，是一种以进行性记忆障碍和智能衰退为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病[1]。AD发病机制极其复杂，病因学尚不清楚，其典型的病理特征是老年斑(SP)形成、神经纤维缠结(NFT)及胆碱能神经元的变性、坏死。其中，NFT的数量和患者的痴呆程度呈明显的正相关，被认为是AD患者的神经元退化的病理基础[2]，是AD的核心病理改变。NFT的主要成分是由异常过度磷酸化的tau蛋白聚集而形成的双螺旋(PHFs)。糖元合成酶激酶3β(GSK-3β)是最重要的催化tau蛋白磷酸化的蛋白激酶之一[3]，GSK-3β在tau蛋白磷酸化及其在AD致病过程的作用及GSK-3β抑制剂在AD防治方面具有潜在作用[4]。而蛋白质磷酸酶2A(PP2A)是一种丝/苏氨酸磷酸酶，能使蛋白质脱磷酸，PP2A活性的降低可能是导致AD患者脑中Tau蛋白过度磷酸化的原因[5]。

    本实验应用脑立体定向技术向大鼠海马注射冈田酸建立AD大鼠动物模型，采用酶联免疫吸附法检测大鼠海马GSK-3β和PP2A活性，观察温脾通络开窍汤对其表达水平的影响，探讨温脾通络开窍汤抗AD的作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 3月龄SPF级雄性SD大鼠60只，体重(200±20)g，由广西医科大学动物中心提供(编号：SCXK2007-0002)。

    1.1.2 实验药品及试剂 温脾通络开窍方(黄芪30g，益智仁10g，三七10g，石菖蒲10g，何首乌10g，绞股蓝10g)，由江苏江阴天江药业有限公司提供中药配方颗粒；冈田酸(OA)Sigma公司生产(批号：04511)；二甲亚砜(DMSO)Amresco公司生产(批号：0231)；石杉碱甲，浙江震元制药有限公司生产(批号：120303)；GSK-3β及PP2A大鼠Elisa试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。

    1.1.3 主要器材和设备 脑立体定位仪(ST-3ND型脑立体定位)，成都仪器厂生产；Morris水迷宫设备全套(包括Morris水迷宫、电脑摄像系统、配套软件分析系统)，北京中科院生理所生产；酶标仪(ELX-800，美国BlO-Tek)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 造模方法 60只SD大鼠适应性喂养1周，大鼠经10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后，固定于大鼠脑立体定位仪上 ......