陈晓锋，王婧婧，陆 惠

    干细胞是机体在发展适应过程中保留的一部分未分化的原始细胞，是具有全部或部分分化能力的细胞，在一定条件下这些干细胞可以增殖和分化成多种功能的细胞或组织器官。内源性干细胞(neural stem cells，NSC)是来自机体本身的干细胞，是储备在人体内的巨大修复潜力的干细胞，侧脑室壁的室管膜下区和海马齿状回的颗粒下区是内源性神经干细胞主要集中区域[1]。内源性神经干细胞在一定条件下可以分化产生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞[2]。壮通饮作为临床治疗脑梗死的壮医药经验方，主要由扶芳藤、参三七、黄花倒水莲三味特色壮药配伍而成。扶芳藤及参三七有促进干细胞增殖作用，但这些都是拘于对该方中单味药进行的研究。本实验通过壮通饮对诱导新生大鼠海马NSC分化过程的研究，阐明壮通饮促进神经再生机制提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 新生 Wistar大鼠，由广西医科大学动物实验中心提供。

    1.2 主要试剂 一抗为鼠抗巢蛋白(Nestin)、神经元核心抗原(NeuN)和髓鞘碱性蛋白(MBP)单克隆抗体以及胶原纤维酸性蛋白(GFAP)多克隆抗体(Sigma)；ABC试剂盒、FITC羊抗兔IgG购自武汉博士德生物工程有限公司。

    1.3 药物制备 壮通饮：扶芳藤30g，三七10g，黄花倒水莲25g。药材去除杂质切制后，按组方剂量配比，加入生药材10倍量的水，浸泡60min后，用TC-15套式恒温器250V电压加热煎煮。沸腾后将电压调低至150V，保持微沸状态煎煮1h，滤取煎液。药渣再加入生药材8倍量的水，同法煎煮1h，滤取煎液。合并两次煎液，于恒温水浴锅(100℃)蒸发去水分至浓稠状，转入恒温烘箱(60℃)干燥，得干浸膏，称重，收膏率为36.80%，4℃保存，备用。临用前使用蒸馏水溶解浸膏至生药材含量为2.0g/mL。

    1.4方法

    1.4.1 原代培养 取新生当天 Wistar大鼠，乙醇消毒后断头取脑，取双侧大脑海马区于D-Hanks液中，剥离出脑膜及血管，用眼科剪剪碎成糊状，加DMEM/F12培养液(Hyclone)，用细口吸管机械吹打，200目金属滤网过滤后获得单细胞悬液并计数，以5×105/mL的细胞浓度接种到培养瓶中，加入2%B27、终浓度为20ng/mL的EGF和bFGF(均为Gibco产品)后置37℃、5%CO2恒温孵箱中培养每3d～4d进行半量补液 ......