孙雪菲，司沛沛，杨小荣，张 策

    HuR是RNA结合蛋白(RNA-binding proteins，RBPs)中果蝇胚胎致死异常视觉(embryonic lethal abnormal vision，ELAV)家族的一员，它通过和细胞内mRNA非翻译区富含Au元件(ARE)的结合，保持mRNA的稳定性，使之不易被降解而增强其表达，发挥其转录后的调控作用。HuR蛋白作为ELAV家族中唯一一种广泛表达的蛋白，能在多种细胞系中表达，并参与生物发育的正常生命活动过程。

    SH-SY5Y细胞是1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SHSY5→SH-SY5Y)。该细胞繁殖快，细胞形态、生理和生化功能与正常神经细胞相似，被广泛应用于神经系统疾病发病机制和药物作用机制方面的研究。

    本实验拟通过RNA干扰技术，探讨HuR基因沉默后对SH-SY5Y细胞活力的影响，初步阐明HuR蛋白在SH-SY5Y细胞的发生和发展中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 试剂和抗体 细胞培养试剂DMEM、F12、增强型考马斯蛋白定量试剂盒购自博士德，澳洲血清(FBS)购自Gibico公司。质粒提取试剂盒购自全式金生物有限公司；Lipofectamine 2000转染试剂、Opti-MEM无血清培养基购自Invitrogen公司。兔抗人HuR抗体购自Abcam公司。细胞裂解液购自武汉碧云天生物科技有限公司。cck-8试剂盒购于Dojindo公司，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。β-actin山羊抗兔二抗购自中杉金桥；Super ECL Plus超敏发光液购自普利莱基因技术有限公司。

    1.2 细胞培养 SH-SY5Y细胞株购自上海中科院细胞库，用含有10%FBS、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的DMEM和F12培养基，将细胞以1×105的浓度接种于孔板或培养瓶中，在37℃含5%CO2孵箱中培养。

    1.3 质粒构建与转染 HuR干扰质粒(5′-AAGGACGTAGAAGACATGT-3′)由广州复能基因构建 ......