吴 林，杨进平，温惠娟，王青碧，蔡鑫昆，毕信亚，麻小梅，赵海涛

    阿尔茨海默病(AD)又称老年性痴呆，是一种以进行性记忆障碍和智能衰退为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病[1]。AD发病机制极其复杂，病因学尚不清楚，其典型的病理特征是老年斑(SP)形成、神经纤维缠结(NFT)及胆碱能神经元的变性、坏死。其中，NFT的数量和患者的痴呆程度呈明显的正相关，被认为是AD患者的神经元退化的病理基础[2]，是AD的核心病理改变。NFT的主要成分是由异常过度磷酸化的Tau蛋白聚集而形成的双螺旋(PHFs)。

    本实验首先应用脑立体定位技术向大鼠右侧海马注射冈田酸建立AD大鼠动物模型，采用经典的Morris水迷宫实验，对AD大鼠动物模型进行筛选并观察温脾通络开窍法对AD大鼠学习记忆障碍的改善作用，以及采用蛋白免疫印迹法检测AD大鼠海马组织Tau蛋白磷酸化总量，旨在进一步探讨温脾通络开窍汤抗AD的作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 3月龄，SPF级雄性SD大鼠60只，体重200g±20 g，由广西医科大学动物中心提供(编号：SCXK2007-0002)。

    1.2 实验药物 温脾通络开窍方(黄芪30g，益智仁10g，三七10g，石菖蒲10g，何首乌10g，绞股蓝10g)，由江苏江阴天江药业有限公司提供中药配方颗粒；石杉碱甲，浙江震元制药有限公司生产(批号：120303)。

    1.3 实验试剂 冈田酸(OA)，Sigma公司生产(批号：04511)；二甲亚砜(DMSO)，Amresco公司生产(批号：0231)；兔抗大鼠磷酸化 Tau抗体(PHF-1，批号：ab32057)购自 Abcam 公司；HRP标记羊抗兔二抗、BCA蛋白浓度检测试剂盒、免疫印迹化学发光试剂、蛋白提取试剂盒、预染的蛋白Marker、PVDF膜购自上海碧云天生物技术有限公司。

    1.4 主要器材和设备 脑立体定位仪(ST-3ND型脑立体定位)，成都仪器厂生产；Morris水迷宫设备全套(包括 Morris水迷宫，电脑摄像系统，配套软件分析系统)，北京中科院生理所生产；Bio-Rad垂直板式电泳槽仪，美国；DSCT-200数码相机(日本SONY)。

    1.5 方法

    1.5.1 造模方法 60只SD大鼠适应性喂养1周，大鼠经10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后，固定于大鼠脑立体定位仪上。手术器械均消毒，常规皮肤消毒，无菌操作。52只大鼠实施OA右侧的海马CA1区注射造模，另8只作为空白对照组。参照George等的《大鼠脑立体定向图谱》 ......