郭淑贞，啜文静，付帮泽，王 勇，冯玄超，廉洪建，李长虹，郑 磊，王 伟

    证候是疾病特定阶段的病生理特征的综合反映。除了宏观四诊信息，证候在微观生物学指标层面必然也存在着特征性的变化。证候特征性生物学标志物的发现，有利于提升临床证候辨识的客观性与准确性。本文拟采用双向电泳等蛋白质组学研究手段，探讨冠心病(心肌缺血)气虚血瘀证特征性的血浆蛋白质谱，并分析其与证候表征的相关性，为后续的证候生物学标志物的临床研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 对象 采用课题组前期建立的方法，制备小型猪心肌缺血气虚血瘀证病证结合动物模型[1]。中华小型猪(中国农业大学小型猪养殖基地，体重25 kg±4 kg，月龄6～10个月)左冠脉前降支近端放置Ameroid缩窄环制备心肌缺血模型。在模型动物符合心肌缺血气虚血瘀证诊断的窗口(术后8周)，采集舌象、心功能等指标并采集血浆样本用于后续实验。以同期的假手术动物作为对照。每组6只。

    1.2 舌r、g、b分析 数码相机拍照记录动物舌象，以casmatch比色卡(BEAR Medic Corporation，日本)作为参照，采用photoshop软件分析舌RGB值，并计算r、g、b。

    1.3 左室射血分数检测 心动超声(惠普Agilent SONOS 5500，美国)Simpson法检测左室射血分数(LVEF)。

    1.4 血浆样本收集和制备 动物颈部前腔静脉采血3 m L，采用枸橼酸钠抗凝，并加入蛋白酶抑制剂(Roche)，4℃，3 500转/分，离心25 min，收集上清，分装后-80℃保存。

    1.5 双向凝胶电泳 样品冰上解冻后，4℃、12 000 g，离心5 min，取上清。Bradford法测定血浆蛋白质含量后，取1.3 mg上样，补加重胀液至450μL。平衡后的胶条转入提前制好的厚度为1.0 mm、13%的SDS-PAGE胶中，采用ETTAN Dalt Six电泳系统进行第二向分离。确定胶条与二相胶面接触良好，0.5%琼脂糖封胶。凝胶通过UMAX 2100XL扫描，胶图数据存储后 ......