王利梅

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 雄性SD大鼠20只，体重250g～400g，由山西医科大学实验动物中心提供。

    1.2 主要试剂 野百合碱(MCT)，SABC试剂盒，基质金属蛋白酶抗体，DAB显色剂及苏木精，二抗(生物素化的羊抗兔IgG)。

    1.3 主要器材 电子天平，彩色多普勒超声仪(philips iE33型)，探头(L11-3线阵，频率3MHz～11MHz)，压力传感器(YL-3和 YL-4型)，生理记录仪(SJ-42型)，显微镜，微波炉，电冰箱，恒温孵箱，BI-2000图像分析仪。

    1.4 方法

    1.4.1 大鼠肺动脉高压(PAH)模型的建立和分组 雄性(SD)大鼠，称取体重后，以2%野百合碱(MCT)按60mg/kg剂量一次性在大鼠背部脊柱旁皮下注射，诱导肺动脉高压模型。正常对照组则同期皮下注射等体积生理盐水。于注射后第21天(3周末)做彩色多普勒超声检查。随后测量平均肺动脉压(mPAP)和平均颈动脉压(mCAP)的变化。肺部组织做病理切片HE染色观察肺动脉结构的改变，确定肺动脉高压动物模型的成功建立。大鼠注射MCT后移于笼中，于清洁级环境，每笼饲养5只大鼠，自由进食。标准鼠食和饮自来水，室温调节在21℃±1℃。

    1.4.2 大鼠肺动脉根部内径、肺动脉峰值流速的测量 大鼠称重，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧固定后，彩色多普勒超声测量各组大鼠肺动脉峰值流速、肺动脉根部内径。

    1.4.3 平均肺动脉压和平均颈动脉压的测量 超声检测后，取胸骨正中切口，自右侧颈外静脉插管至肺动脉，同时行左侧颈总动脉插管，分别连接YL-3和YL-4型压力传感器，输入SJ-42型生理记录仪测定mPAP和mCAP。

    1.4.4 右心室肥厚指数的测量 完成肺动脉压测量后，放血处死大鼠后，暴露心脏和肺，将完整心脏、肺一同取出，冷生理盐水冲洗干净，分离肺、右心室(RV)和左心室(包括室间隔，LV+S)，滤纸蘸干称重，计算右心室肥厚指数：(RVHI)＝RV/(LV+S)。

    1.4.5 肺组织标本制备 在右心游离壁切取5mm厚的横截面标本，在左肺门处横断取一10mm×10mm×5mm大小的肺组织，10%的甲醛固定48h～72h。固定的标本经充分水洗，酒精脱水和二甲苯透明后，以石蜡包埋，连续切片，切片厚度5 μm。经HE染色(苏木素/伊红)后做病理组织形态学检查。并在100倍的光学显微镜下，观测直径100μm～200μm的呼吸性细支气管的终末小肺动脉的中膜厚度 ......