王晓宁,张艳虹,徐凤芹

    ·基础医学论著////研究·

    化浊通脉方对动脉粥样硬化兔主动脉小凹蛋白1及亲环素A的影响

    王晓宁1,张艳虹1,徐凤芹2

    目的研究化浊通脉方对动脉粥样硬化(AS)兔胆固醇跨膜逆转运关键蛋白小凹蛋白-1(cav-1)及亲环素A(Cyclophilin A)的影响,探讨其通过促进胆固醇跨膜逆转运抗AS的可能机制。方法40只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、中药复方组、辛伐他汀组。采用单纯高脂喂养法复制兔AS模型。造模、给药15周后取胸主动脉,HE染色观察各组动脉斑块形成,蛋白印迹法(WB)测定主动脉壁内cav-1及亲环素A表达量,实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定主动脉壁内cav-1及亲环素AmRNA表达量,观察实验药物对胆固醇逆向转运相关蛋白及mRNA表达的影响。结果HE染色结果显示,模型组兔胸主动脉管壁上粥样斑块形成明显,各给药组较模型组有不同程度的改善。WB结果显示,与对照组相比模型组cav-1表达量明显下降(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 纯种健康新西兰大耳白兔40只,雄性,(8~10)周龄,体重2.275 kg±0.155 kg,中国医学科学院实验动物研究所提供,单笼饲养,9 d适应性喂养后进行实验。

    1.2 实验药物及特殊饲料 化浊通脉方颗粒剂由北京康仁堂药业公司生产,由泽泻、虎杖、草决明、郁金等共七味中药组成;辛伐他汀片(商品名:舒降之),20 mg/片,杭州默沙东制药有限公司生产;高脂饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司生产。

    1.3 主要实验仪器及试剂 电泳仪(Tanon,VE-

    180),转膜仪(Tanon,VE-186),定量PCR仪(StepOne PLUS App lied Biosystems),凝胶成像系统(JY04S-3C,北京君意东方电泳设备有限公司)。

    1.4 模型制备与分组给药方法 参照文献配比高脂饲料[4],采用单纯高脂喂养法建立兔AS模型。新西兰兔40只,按随机数表法分为4组,每组10只。空白对照组予普通饲料150 g/d;模型组予高脂饲料150 g/d。各组每日给药量:中药复方组由泽泻、虎杖、决明子、郁金等共七味中药组成,合计生药6.5 g/(kg·d);辛伐他汀组合辛伐他汀1 mg/(kg·d)。连续喂养15周。

    1.5 观察项目及检测方法 WB检测cav-1/亲环素A蛋白表达,采用化学发光试剂盒显影,结果以X光片显示。扫描仪收集图像,并使用Quan tity One分析目标条带及内参蛋白β-actin灰度值,做初步定量统计 ......