陈 烜,侯玉立,李伟荣,张 栋,何芙蓉

    血浆miRNAs在急性病理期缺血性脑卒中的表达谱分析

    陈 烜1,侯玉立2,李伟荣3,张 栋4,何芙蓉3

    目的探讨缺血性卒中在病理分期的急性期(24 h内)外周血浆中miRNA的表达及临床意义。方法选取急性脑梗死患者和健康对照者各5例。收集急性脑梗死患者发病24 h之内的血浆和健康对照者的清晨空腹血浆。采用TaqManmicroRNA Arrays进行miRNAs表达谱筛选。使用相关统计学软件及统计方法进行数据分析。结果与健康对照组相比,在缺血性脑卒中发病24 h内外周血浆中存在差异表达的miRNA。本研究共检测有统计意义的显著差异表达的miRNA 66个,其中表达上调的39个,下调的27个。上下调倍数变化最显著的miR 4498上调7.84倍(foldchange=7.84),miR 676-5P下调为0.167(fold change= 0.167),P均1 资料与方法

    1.1 一般资料 急性脑梗死患者5例,为太原市中心医院神经内科收住的急性缺血性卒中患者。所有患者符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的诊断标准,均经详细的神经系统检查及头颅MRI影像学检查确诊。排除自身免疫性疾病,恶性肿瘤、高热、呼吸系统疾病等。对照组为5名健康志愿者,年龄、性别比例与患者相匹配。本研究所有标本的获取均经研究对象同意。

    1.2 试剂与仪器 总RNA的提取采用TRIzol(Invitrogen)和miRNeasy mini kit试剂盒提取(Qiagen公司);使用microRNA miRCURYTmLNAArray(version 18.0)基因芯片筛选差异表达miRNA(丹麦Exiqon公司)

    1.3 标本收集 5例急性缺血性卒中患者收集急性发病24 h外周静脉血。同时收集5名健康志愿者血浆。所有样本于清晨空腹采集。使用EDTA抗凝管收集外周静脉血6 mL,并轻轻上下颠倒混匀至于4℃冰箱保存,在1 h之内进行血浆分离。4℃2 000×g离心10min,取上层血浆移至1.5mL无RNA酶(RNasefree)离心管中。4℃1 600×g离心5 min,吸取上层浆至2 mL旋盖尖底无RNA酶(RNase-free)离心管中;装好置于-80℃冰箱保存备用 ......