远隔缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用

    王洪志,张一娜,武小薇

    摘要:目的 探讨远隔缺血预适应(RIPC)对心肌细胞缺血再灌注(IR)损伤的保护作用,深入研究硫氧还蛋白(Trx)在RIPC信号通路中的作用。方法 选择Wistar雄性大鼠72只随机分为6组,分别为对照组、IR组、RIPC+IR组、Trx拮抗剂组、PI3K抑制剂组、单纯RIPC组。制作RIPC和IR模型,采用称重法检测心肌梗死范围、TUNEL法检测细胞凋亡,光镜观察病理形态学改变,免疫组化法检测Trx的表达。结果 对照组和单纯RIPC组细胞结构、形态正常;IR组、Trx拮抗剂组和PI3K抑制剂组心肌纤维排列紊乱,心肌细胞呈大片状坏死;RIPC+IR组心肌结构相对完整,局灶性心外膜下变性坏死,保护了心肌。与对照组和单纯RIPC组比较,其他各组心肌凋亡率和梗死范围显著增加;IR组、Trx拮抗剂组、PI3K抑制剂组差异无统计学意义;与RIPC+IR组比较,IR组、PI3K抑制剂组和Trx拮抗剂组细胞凋亡率明显增加(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器 HX 300动物呼吸机,成都泰盟科技有限公司;RM6240B型多道生物信号采集处理系统,成都仪器厂;LY294002(PI3K抑制剂),碧云天生物技术研究所;PX 12(Trx拮抗剂),英国Tocris公司;SP Mouse HRP Kit鼠Streptavidi n HRP试剂盒、DAB Kit(DAB显色试剂盒),北京康为世纪生物技术有限公司;Trx小鼠抗大鼠多克隆抗体,Santa公司;HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)、HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、HRP标记抗小鼠二抗、HRP标记抗山羊二抗,中衫金桥公司;凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(BIOTIN标记POD法),凯基生物。

    1.2 心肌I/R损伤模型 大鼠以10%水合氯醛(3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉,连续监测Ⅱ导心电图(ECG),气管插管呼吸机辅助呼吸。沿胸骨左缘分离肋骨,暴露心脏,于左心耳下3 mm~4 mm略靠近动脉圆锥处结扎前降支。缺血45 min后剪开结扎线,再灌注180 min,为心肌I/R损伤模型。

    1.3 RIPC模型 大鼠以10%水合氯醛(3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉,选择一侧下肢小心分离出股动脉,动脉下穿线小心提拉5 min使血流中断,放松10 min使血流恢复,反复进行3次后缝合皮肤,单独饲养24 h后进行后续试验 ......