王朝霞，赵 烨，范春雨，吕吉元

    17β-雌二醇对H2O2致血管内皮损伤的保护作用及机制的研究

    王朝霞，赵 烨，范春雨，吕吉元

    目的 探讨17β-雌二醇对H2O2引起的血管内皮损伤的保护作用和可能的机制。方法 人脐静脉内皮细胞株在37 ℃、5%CO2，条件下正常培养至细胞形成致密单层时，分别进行干预。实验分为5组，空白对照组：细胞正常培养，含10%胎牛血清DMEM培养基培养；过氧化氢损伤组：将培养融合状态达到80%～90%的HUVEC，每孔加入终浓度为0.75 mmol/L的H2O2；H2O2损伤+17β-雌二醇保护组：H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组，17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L；单纯17β-雌二醇组：17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L；H2O2损伤+17β-雌二醇保护+渥曼青霉素组 H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组，17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L，渥曼青霉素终浓度100 nmol/L。收集干预后的各组细胞，Western-blot法检测细胞内PI3K/Akt蛋白表达情况，用CCK-8法比较细胞活性，流式细胞技术测定细胞凋亡率，荧光探针标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果 17β-雌二醇可以明显提高氧化应激损伤组内皮细胞中PI3K/Akt的表达，17β-雌二醇可以明显提高H2O2损伤后血管内皮细胞的存活率，降低早期和晚期凋亡率，并且减少H2O2损伤后血管内皮细胞内的ROS含量，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自北京协和医科大学细胞中心，Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)、胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品，17β-雌二醇购自美国Sigma公司，CCK-8购自碧云天试剂公司，小牛血清购自Hyclone公司，渥曼青霉素购自Alexis公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 人脐静脉内皮细胞采用含10%的胎牛血清的DMEM培养基培养，置入37 ℃，5%CO2细胞培养箱内，所有实验检测于培养3 d～4 d细胞达80%～90%融合状态后进行。

    1.2.2 实验分组 空白对照组：细胞正常培养，含10%胎牛血清DMEM培养基培养；过氧化氢损伤组：将培养融合状态达到80%～90%的HUVEC，每孔加入终浓度为0.75 mmol/L的H2O2；H2O2损伤+17β-雌二醇保护组：H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组，17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L；单纯17β-雌二醇组：17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L； H2O2损伤+17β-雌二醇保护+渥曼青霉素组：H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组 ......