张永胜

    急性心肌梗死是临床常见的心脑血管疾病之一，其发病率、致死率和致残率高，已经成为严重影响人类健康的公共疾病之一[1，2]。目前研究显示心肌梗死产生的氧化应激、负荷过重、缺血、缺氧、再灌损伤等可诱导心肌细胞凋亡，因此如何有效地抑制心肌细胞凋亡，对缓解和治疗急性心肌梗死具有重要的意义[3]。Bax是Bcl-2家族中研究最为广泛的促凋亡蛋白，其主要表达于细胞质中，可形成同源二聚体或者与Bcl-2 形成异源二聚体而介导细胞凋亡[4，5]。近年来研究显示在急性梗死心肌组织中Bax 蛋白的表达量明显升高，提示其可能参与了急性心肌梗死心肌细胞的凋亡，加重了心肌功能的损伤[6]。RNA 干扰技术是近年来发展起来的基因操作技术，其可特异性的沉默相关基因的表达，对调节细胞生物学功能具有重要的意义[7]。本研究探讨了RNA 干扰技术沉默Bax 基因对急性心肌梗死大鼠心肌组织的保护作用，旨在为临床治疗急性心肌梗死提供一定的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 SD 大鼠(180g～200g)购自上海莱斯克动物有限公司；Bax一抗购自美国Abcam 公司；HRP-羊抗鼠二抗购自santa cruz公司；脂质体和Triozol购自Invitrogen公司；SYBR Green通用型qPCR Master Mix 购 自 罗 氏 生 物；Real-time PCR 扩 增 仪 购自Applied Biosystems；逆转率试剂盒购自TAKARA公司；经修饰的Bax-siRNA 由吉玛生物合成；；TUNNEL试剂盒购自罗氏生物；TTC 染液购自南京森贝伽生物科技有限公司。

    1.2 急性心肌梗死大鼠模型构建及治疗 45只大鼠随机分为假手术组、心梗组和Bax干扰组。所有大鼠采用10%的水合氯醛麻醉，固定大鼠并打开胸腔，假手术组不做左冠状动脉前降支结扎。心梗组和Bax干扰组大鼠开胸后行左冠状动脉前降支结扎术。模型构建成功标志为：大鼠左心室前壁苍白，多导生理记录仪显示大鼠心电标准Ⅱ导联，ST 段抬高和(或)T 波抬高。手术结束后所有大鼠关闭胸腔，手术切口注射青霉素抗感染。假手术组和心梗组在术前12h心肌组织内注射100μL脂质体，Bax干扰组大鼠术前心肌注射脂质体与Bax siRNA 的混合物100μL ......