汪沁沁，岳温恒，伍 锋，贺治青，梁 春，吴宗贵

    晚期糖基化终产物对内皮祖细胞功能及成骨分化的影响

    汪沁沁，岳温恒，伍锋，贺治青，梁春，吴宗贵

    摘要：目的观察糖尿病机体主要的晚期糖基化终产物亚型-Nε羧甲基赖氨酸修饰白蛋白(CMLs)对内皮祖细胞(EPCs)功能及成骨分化作用的影响。方法 采用密度梯度离心法从外周单个核细胞中分离、培养得到EPCs，通过观察细胞形态和流式细胞仪检测细胞表面标记鉴定。进一步采用CCK-8增殖试剂盒、Annexin V-FITC/PI流式凋亡试剂盒、transwell小室迁移实验分别观察空白对照组、BSA对照组(100 μg/mL)、不同浓度CML-BSA组(20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL)，共7组干预液对EPCs增殖、凋亡、迁移功能的影响。并检测成骨相关钙化基因BMP-2、ALP、RUNX-2和OCN的表达量，观察其对EPCs成骨分化能力的影响。结果与BSA对照组相比，CML-BSA能显著抑制EPCs增殖和迁移的能力，增加凋亡，促进其成骨分化(P

    表1 成骨相关基因引物序列

    2结果

    2.1EPCs培养及鉴定结果(见图 1)EPCs在培养第3天可见成集落样生长(图1A)，第8天可见细胞呈长梭形生长，细胞密集(图1B)。本课题组之前采用ac-LDL(acetylated- low density lipoprotein)和UEA-1标记EPCs；并通过流式分析细胞表型，结果显示分离的EPCs表达内皮细胞表面标记物CD34、CD31、CD105、CD73、KDR、CD146和HLA-ADC，且不表达血液中其他单个核细胞的表面标记物CD14、CD45、CD133、CD90和HLA-DR。

    注：A为EPCs呈集落生长(箭头所指为细胞呈集落样生长)；

    B为EPCs呈密集生长(细胞呈长梭状极性生长)

    图1EPCs的分离与培养(×200)

    2.2各组EPCs增殖、迁移、凋亡的比较(见表2)与BSA组比较 ......