阳成成，吴晓梅

    骨髓间充质干细胞对大鼠肺纤维化的抑制作用

    阳成成，吴晓梅

    哈尔滨医科大学附属第二医院(哈尔滨 150086)，E-mail：344643928@qq.com

    摘要：目的分析大鼠气管内注入博来霉素(BLMS)后，观察不同时间点移入骨髓间充质干细胞(MSC)的分化行为，分析细胞因子表达规律及其与病理变化的相关性，确定MSC移植治疗实验性肺纤维化大鼠的最佳时间窗及标准，旨在为临床上干细胞移植治疗肺纤维化的时机提供可靠参考依据。方法体外分离和培养雄性Wistar大鼠的MSC。将60只雌性Wistar 大鼠随机分为4组：A组为生理盐水对照组，气管内注入PBS50 μL；B组为博来霉素模型组，向气管内注入BLMS 5 mg/kg；C组气管内注入BLMS后立即尾静脉注射移植MSC 1×107/mL，200 μL；D组气管内注入BLMS 14 d后移植MSC 1×107/mL，200 μL。于实验7 d、14 d、28 d(D组于28 d)分别处死大鼠5只，取肺组织病理切片行HE及Masson染色，观察肺部炎症和纤维化情况及羟脯氨酸(HYP)含量测定；提取肺组织通过聚合酶链反应( PCR ) 检测雄性鼠的性别决定基因(SRY)；提取肺组织免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果病理切片观察：B组第7天肺泡炎最明显，28 d时肺纤维化最严重，与其他3组比较有统计学意义(P50%，偶可见到肺泡腔内有单核细胞及出血造成的实变。

    1.7胶原纤维染色的定性分析参照Fulmer方法，用Masson染色将肺纤维化分5级：0级：正常肺组织；Ⅰ级：微小纤维化，肺泡间隔基本正常，局部有间质纤维化，无肺泡的破坏及肺网架结构的改变，肺胶原纤维与正常肺相比升高不小于10%；Ⅱ级：轻度纤维化，肺泡间隔为轻度增厚，部分区域有正常肺泡，全肺的胶原纤维与正常肺相比占10%～25%；Ⅲ级：中度纤维化，肺泡间隔中度增厚，正常肺泡少见，间质结构破坏，全肺胶原纤维与正常肺相比升高至25%～40%；Ⅳ级：严重纤维化，所有的肺泡间隔均有不同程度增厚，但仍有可辨认的肺泡结构存在，许多修复部位失去正常间质结构，全肺胶原纤维与正常肺相比升高至40%以上。

    1.8大鼠肺组织细胞来源检测取(50～100) mg肺组织按照组织基因组DNA提取试剂盒方法 ......