张俊涛，刘志贞，刘 丹，张悦红

    高糖对神经干细胞凋亡的影响

    张俊涛，刘志贞，刘丹，张悦红

    目的探讨高糖环境是否可以诱导神经干细胞凋亡。方法从C57大鼠海马组织提取培养神经干细胞，分为3组：正常对照组、低糖组(5 mmol/L)、高糖组(50 mmol/L)，不同浓度葡萄糖作用48 h后，运用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 梯状条带、流式细胞术检测细胞凋亡。结果培养的神经干细胞具有形成神经球的能力，Nestin免疫荧光染色呈阳性反应，可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。琼脂糖凝胶电泳显示高糖组提取的DNA出现特征性梯状条带，正常对照组和低糖组未出现。流式细胞术检测正常对照组细胞凋亡率(5.83±0.36)%，低糖组细胞凋亡率(6.25±0.52)%，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)；高糖组细胞凋亡率(20.97±1.21)%，与正常对照组和低糖组比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1材料葡萄糖购于Sigma公司，DMEM/F12培养基、B27 购自Gibco公司，EGF、bFGF购自PeproTech公司，Nestin、NF-H、GFAP、GALC兔抗小鼠多克隆抗体购于SANTA CRUZ公司，FITC标记羊抗兔二抗、Cy3标记羊抗兔二抗购于Invitrogen公司，DNA ladder检测试剂盒购于生工生物工程(上海)股份有限公司。

    1.2神经干细胞培养及鉴定

    1.2.1神经干细胞培养取成年C57小鼠(山西医科大学实验动物中心提供)大脑组织分离海马区域，采用机械消化法，反复吹打海马组织直到呈单细胞悬液，收集细胞悬液，1 000 r/min离心5 min，去上清，神经干细胞培养液重悬，通过细胞计数调整细胞浓度为1×106/mL，转移至50 mL细胞培养瓶，37 ℃、5% CO2培养箱中悬浮培养。

    1.2.2神经干细胞鉴定将神经干细胞球吸出转移至6孔板中 ......