侯 亮，路英进，丁彦春

    ·基础医学论著/研究·

    养心氏对巨噬细胞极化及活化的调节

    侯 亮1，路英进1，丁彦春2

    目的 以人单核细胞株THP-1细胞为基础，观察养心氏对THP-1源性巨噬细胞极化和活化的影响，为养心氏抗动脉粥样硬化机制提供理论依据。方法 分别以不同浓度(10 mg/L，25 mg/L和50 mg/L)的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激THP-1源性巨噬细胞24 h，以空白为对照组，用ELISA法测定上清液中的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的浓度，用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD16及CD68的表达。用不同浓度的养心氏(10 mg/L，50 mg/L和100 mg/L)预处理THP-1源性巨噬细胞12 h，再用50 mg/L的 ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞24 h，检测上清液中MIF、MCP-1的浓度以及CD16及CD68的表达情况。结果 ox-LDL能以剂量依赖的方式诱导THP-1源性巨噬细胞分泌MCP-1和MIF，其中50 mg/L 组表达最高，MCP-1(29.30±1.48)pg/mL，对照组为(5.71±1.94) pg/mL；MIF(18.67±0.15) ng/mL，对照组为 (4.61±0.40) ng/mL(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 人单核细胞系THP-1购自中科院上海细胞库，ox-LDL购自北京欣源佳和生物科技有限公司，人MIF ELISA试剂盒购自上海细胞生物公司，人MCP-1 ELISA试剂盒购自达科为生物技术有限公司，流式细胞抗体CD16-FITC、CD68-FITC、IgG2a-FITC购自BD公司，其他试剂为国产或进口分析纯。

    1.2 细胞培养及THP-1细胞的诱导分化 THP-1单核细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5%CO2条件下培养。倒置显微镜下可见细胞呈单个、圆形、悬浮生长。每2 d～3 d按1∶2～1∶3传代一次。选取3～4代以后细胞，以1×106/mL细胞密度接种于6孔板，以160 nmol/L PMA诱导24 h后，细胞贴壁，变成不规则形或梭形，伸出伪足，诱导形成巨噬细胞。

    1.3 养心氏的制备 用RPMI1640培养液溶解养心氏，配制为1.0 g/L的原液。37℃水浴30 min，充分振荡30 min，超声溶解1 min，1 000 r/min离心10 min，取上清液过滤灭菌，用于细胞培养。预实验中应用MTT法检验养心氏对THP-1源性巨噬细胞的毒性作用 ......