沈玉珏

    黄芪多糖对H2O2所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响

    沈玉珏

    目的 研究黄芪多糖(APS)对H2O2所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为：空白对照组、H2O2组、APS(20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L)+H2O2组，每组设10个复孔；给药干预24 h后，MTT法检测细胞存活率，通过流式细胞术(Flow Cytometry)检测细胞凋亡状况并计算凋亡率；测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量，培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]含量，Western blot法检测细胞中NF-κB、caspase-3蛋白表达并进行半定量分析，RT-PCR法检测AKT mRNA、bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值。结果 与H2O2组比较，APS(40 μmol/L、80 μmol/L)+H2O2组细胞存活率显著升高，细胞凋亡率显著降低；细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低，培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低，细胞中caspase-3、NF-κB蛋白表达量显著降低，AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调，Bax mRNA表达显著下调，bcl-2/Bax表达比值显著升高，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 试验药物与试剂 黄芪多糖(西安沃森生物科技有限公司，批号：20131205)； DMEM培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；甲基四唑蓝(MTT，美国Sigma公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)；谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)；AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒(上海时代生物科技有限公司)；核转录因子(NF-κB)、caspase-3单克隆抗体(碧云天生物技术有限公司)；AKT、bcl-2、Bax上下游引物(上海博亚生物公司)。

    1.2 实验动物 清洁级雄性SD大鼠1 d～3 d乳鼠[9]，购自河北省实验动物中心，许可证号：SCXK(冀)2008-1-003，动物合格证号：150406007。

    1.3 主要仪器 SW-4T-2F洁净工作台(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)； NU-4850E型CO2培养箱(美国Nu Aire公司)；VCX750型超声波细胞破碎仪(美国SONICS公司)；UV762型紫外-可见分光光度计(上海楚定分析仪器有限公司)；BS-300型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)；iMark型酶标仪、FACS Aria型流式细胞仪(美国BD公司)；DYY-11 型多用电泳仪、JY-SCZ2电泳槽(北京六一仪器厂)；RT-PCR仪(武汉新未来仪器技术有限公司) ......