赵 慧，王 雄，魏晓倩

    异丙肾上腺素预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激的影响

    赵 慧，王 雄，魏晓倩

    目的 探讨异丙肾上腺素预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激的影响，阐述相关保护机制。方法 将32只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、异丙肾上腺素预处理组(ISO组)和选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂ICI118551+ISO-I/R组(ICI组)，每组8只。通过结扎左冠状动脉前降支(LAD)30 min再灌注2 h建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。用苏木素伊红染色法观察大鼠心肌组织形态，蛋白印记法测定磷酸化丝/苏氨酸激酶(P-Akt)的表达水平，原位末端标记法及免疫组化法分别检测心肌细胞凋亡率及心肌凋亡相关蛋白Caspase-3的表达，黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)浓度。结果 与I/R组比较，ISO组大鼠心肌损伤程度明显减轻，P-Akt的表达明显增多、心肌细胞凋亡率减低、Caspase-3表达减低、血清SOD活性增高、MDA浓度减低，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及试剂 成年雄性SD大鼠32只，体重(225±20)g，由中国食品药品检定研究院提供。异丙肾上腺素及选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂ICI118551购自美国Sigma公司。蛋白印记(Western blot)用兔抗鼠磷酸化丝/苏氨酸激酶(phosphorylated serine/threonine kinase，P-Akt)单克隆抗体(美国abcam公司)，β-actin抗体(bioswamp公司)。原位末端标记(TUNEL)试剂盒、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测试剂盒购自南京建成公司。

    1.2 动物模型的建立 SD大鼠称重后，20%乌拉坦(5 mL/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，以针形电极置于四肢皮下，记录Ⅱ导联心电图，气管插管，连接呼吸机。沿胸骨左缘3～4肋间开口，暴露心脏，于左心耳根部下方2 cm处肺动脉圆锥旁以6-0无创缝合线结扎左冠状动脉前降支，用套管夹闭法阻断其血流。血管结扎成功标准：心电图ST-T抬高(≥0.15 mV)，放松后ST-T回落50%以上。

    1.3 实验分组及干预 用随机数字法将32只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、异丙肾上腺素预处理组(ISO组)和选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂ICI118551+ISO-I/R组(ICI组) ......