呼格吉乐，石芸萍，薛东力，兰海霞

    促红细胞生成素对神经胶质细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响

    呼格吉乐1，石芸萍2，薛东力2，兰海霞3

    目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对神经胶质细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响，为EPO神经保护作用机制的研究提供依据。方法 体外培养用不同浓度EPO混合培养基培养U251细胞，用噻唑蓝(MTT)法筛选EPO的最佳浓度，以EPO最佳浓度的细胞为实验组，未加EPO细胞为阴性对照组，通过细胞克隆实验检测细胞增殖水平变化、通过划痕实验检测细胞迁移能力变化、通过transwell实验检测细胞侵袭能力变化、通过细胞流式术观察EPO对神经胶质细胞凋亡能力的变化。结果 通过MTT实验检测EPO最佳浓度为300 IU/L；克隆实验检测发现细胞增殖水平增加；划痕实验检测发现细胞迁移能力增加；Transwell实验检测发现细胞侵袭能力增加；细胞流式术发现细胞的凋亡能力降低。结论 本实验得出EPO可促进U251细胞的增殖、迁移、侵袭，并抑制其凋亡，因此证实EPO对神经细胞具有保护作用，在临床上为新生儿脑损伤的早期干预治疗提供一条新途径和理论根据。

    促红细胞生成素；神经保护；增殖；凋亡；迁移

    促红细胞生成素(EPO)是一种含唾液酸的特异性糖蛋白激素，胎儿肝脏和成人肾脏是合成、分泌EPO的主要器官，EPO主要通过与红细胞膜上特异性促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor，EPOR)结合促进血液循环中红细胞增殖、分化、成熟及释放，恢复红系祖细胞造血能力，可促进红细胞生成、骨髓红系祖细胞生长及血管生成，抑制红系祖细胞凋亡，参与胎盘血管发生等过程[1]。近几十年来，国内外学者研究发现EPO除促进造血外还具有神经保护和修复作用，并可改善远期神经预后[2]。有研究证实[3-4]：EPO对各种脑损伤有治疗作用，特别是新生儿脑损伤，EPO的早期应用能减轻脑损伤甚至避免脑损伤。近年来，EPO认为是防治新生儿脑损伤最有前途的药物之一[5]。然而EPO治疗和防治新生儿脑损伤的作用机制目前还不明确，有待进一步研究。本研究观察EPO对神经胶质U251细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响，为研究EPO神经保护作用机制奠定实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验细胞 神经胶质U251细胞株，购自中科院上海细胞库。

    1.1.2 实验药品 EPO。

    1.1.3 主要实验试剂及仪器 MEM培养基、胎牛血清、0.25%胰酶、双抗、磷酸缓冲盐溶液(PBS)、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)试剂、试剂、Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、transwell小室、电热恒温培养箱、离心机、生物安全柜、水浴锅、倒置显微镜、酶联免疫检测仪、流式细胞仪等 ......