李江涛，张国珺，严 鹏

    大鼠心肌损伤后S100A4的表达变化及其意义

    李江涛1，张国珺2，严 鹏3

    目的 分析大鼠心肌损伤后S100A4的表达变化及其意义的研究。方法 选取清洁级雄性健康大鼠24只，体重(211.1±6.8)g。按随机数表法随机分为两组对照组与心肌损伤组，每组12只。通过注射异丙肾上腺素进行心肌损伤大鼠的造模，进行取血及心肌组织，采用光镜与电镜对大鼠心肌进行组织学观察；用蛋白免疫印迹法与免疫组织化学法检测心肌蛋白表达。结果 对照组大鼠血液中的一氧化痰(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)值均显著高于心肌损伤组大鼠，而心肌损伤组大鼠的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)值均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料 蛋白定量试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)；S100A4抗体(美国Promega公司)；考马斯亮蓝试剂盒(上海索宝生物科技有限公司)；一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)(北京中生北控生物科技有限公司)；N，N-亚甲基双丙烯酰胺、丙烯酰胺(湖北艾丹医药化工有限公司)、发光显迹液(美国santa公司) ；0.2 mm PVDF膜(美国Millipore公司)；十二烷基磺酸钠(成都银辉国际贸易有限公司)，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG(北京中山生物公司)；乳酸脱氢酶(LDH)；UV8500紫外-可见光分光光度计 (上海天美科学仪器有限公司)；聚丙烯酰胺凝胶电泳仪(美国进口)。

    1.2 心肌损伤大鼠的造模 选取清洁级雄性健康大鼠24只，体重(211.1±6.8)g，购自昆明动物实验中心，所有大鼠进行适应性喂养1周，按随机数表法，随机分为两组，对照组12只，心肌损伤组12只。参考相关文献，心肌损伤大鼠造模方法：采用皮下注射异丙肾上腺素(ISO)法，剂量为850 μg/kg。对照组不进行注射，正常喂养。待造模成功后，采用乙醚麻醉大鼠，取血待测，并迅速取其心肌，浸泡于戊二醛电镜液中测定，剩余的采用液氮进行冷冻保存。

    1.3 观察指标 ①血液生化指标测定及方法，LDH活性测定采用比色法；MDA采用硫代巴比妥酸法；SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化酶法；NO含量测定采用硝酸还原酶法测定。②S100A4蛋白免疫组化检测，大鼠灌注固定30 min，取其心尖部的心肌组织，并迅速浸泡在含4%多聚甲醛的组织固定液中，1周后再进行常规组织脱水、透明、包埋以及石蜡切片等，其片厚5 μm。取适量心肌组织进行匀浆，提取总蛋白，并用考马斯蓝法对蛋白浓度进行测定 ......