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    ·基础医学论著/研究·

    DARPP-32磷酸化与止颤汤改善大鼠帕金森病运动并发症的研究

    黄宁静，陆小青

    目的观察纹状体多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)(Thr34)磷酸化与止颤汤对大鼠帕金森病运动并发症的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于大鼠脑部黑质造成帕金森病(PD)模型，进一步予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射制作异动症(LID)模型。实验设立正常组，LID模型组，LID西药组及小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组，并采用免疫组化法观察各组大鼠DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达情况。结果免疫组化显示，假手术组DARPP-32(Thr34)磷酸化表达明显低于模型组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠50只，体重180 g～220 g，由斯莱克实验动物有限责任公司提供，经反复行为检测确认无旋转行为。

    1.2 药物配制 止颤汤为上海市中医医院名老中医李如奎教授经验方，由上海市中医医院提供，中剂量组药物：黄芪15 g，丹参9 g，钩藤18 g，知母12 g，白芍12 g，制大黄15 g，升麻9 g，水煎浓缩至每1 mL含生药1.28 g。大小剂量组药物剂量分别为在中剂量组基础上增减20%，储存于冰箱备用。

    1.3 方法

    1.3.1 PD大鼠模型制备 腹腔注射2%戊巴比妥钠(45 mg/kg)麻醉，平卧位固定于脑立体定位仪上。大鼠头部局部常规消毒后，剪开头皮，剥离骨膜，参照包新民等[5]所著大鼠脑立体定位图谱确定左侧黑质致密部(SNC)和黑质纹状体通路(VTA)两坐标：①SNC前囟后5.0 mm，矢状缝左侧1.7 mm，颅骨表面下7.6 mm；②VTA前囟后4.6 mm，矢状缝左侧0.9 mm，颅骨表面下7.5 mm；并根据大鼠体重和头颅大小在规定范围内确定具体坐标并以三棱针进行标记，使用牙科钻小心钻透颅骨，按确定坐标将微量注射器缓慢进入预定深度，实验组向每个位点注射lactacystin 8 μg(4 μL)；对照组则注射等体积生理盐水，深度以针孔斜面中点为参照点，以颅骨下硬脑膜处为零点，以1 μL/min速度缓慢旋转推药，注射完毕后留针10 min，缓慢退针，术后常规缝合伤口，连续腹腔注射青霉素[10×104U/(kg·d)]，持续1周预防感染，局部伤口每日碘酒消毒1次，7 d后拆线。术后1周起，每隔7 d 09：00检测行为学，阿扑吗啡(APO)0.5 mg/kg腹腔注射。在直径为40 C1TI容器观察大鼠旋转行为 ......