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编号:224193
姜黄素对心肌细胞缺血再灌注损伤的作用及机制研究
http://www.100md.com 2018年3月8日 中西医结合心脑血管病杂志 2018年第2期
预处理,1材料与方法,2结果
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    缺血再灌注损伤(IRI)是目前临床尚未解决的一个复杂问题,对心血管系统有害,是导致心脏衰竭,心脏手术和心肌梗死后发病率和死亡率高的主要原因[1-2]。IRI是指在病理损伤过程中,心肌细胞在一段时间内出现缺血,血液恢复供应后,出现较灌注之前更严重的损伤,如出现心律失常、心肌梗死面积加大等,许多因素可导致IRI。西医认为心肌缺血再灌注损伤与Ca2+超载,细胞凋亡、坏死和自噬,能量代谢出现障碍,微血栓的形成及血小板的聚集,炎症反应等有关。中医根据其病位及胸闷、胸痛等临床表现,将该病归属于“胸痹”“心悸”等范畴。

    姜黄素(Cur)1,7-双(4-羟基-5-甲氧基苯基)-1,6庚二烯-3,5-二酮(二糠基甲烷),是一类从姜黄根茎中分离出的天然产物(姜黄),该草药已广泛应用在中国和南亚[3-5]。姜黄是姜科植物,其根茎可入药,气香特异,味苦、辛,性温,归脾、肝经;具有破血行气、通经止痛功能,用于胸胁刺痛、胸痹心痛、痛经经闭、癥瘕、风湿肩臂疼痛、跌扑肿痛[6]。姜黄素具有抗氧化、抗炎、抗癌、清除自由基等多方面药理作用。有研究显示,Cur可减轻脑、肾、视网膜、肝脏和结肠的缺血再灌注损伤[7-10]。有相关研究报道,姜黄素后处理通过激活预存活信号通路减轻IR损伤[9,11]。沉默信息调节因子3(SIRT3)[12-15]在肿瘤、炎症、卡路里限制而延长寿命及心肌肥厚等方面有相关研究,其对抗氧化应激从而发挥保护作用,但姜黄素能否通过SIRT3保护心肌细胞IRI目前缺乏相关研究。本研究旨在探讨姜黄素预处理对心肌细胞IRI模型的保护作用及SIRT3所介导的相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 姜黄素、MTT(美国Sigma公司);BCl-2,Bax,Sirt3,β-actin抗体(美国Santa Cruz公司);3-TYP(由重庆大学IDRC创新药物研究中心合成);二抗(北京中山科技有限公司);TUNEL试剂盒(德国Mannheim公司)。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物科技有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 心肌细胞的制备和模拟IR治疗 使用先前报道的方法H9C2的原代培养物培养。将心肌细胞暴露于含有以下试剂的缺血缓冲液:NaCl 137 mmol/L,KCl 12 mmol/L,MgCl20.49 mmol/L,CaCl2·2H2O 0.9 mmol/L和Hepes 4 mmol/L。该缓冲液补充有以下化合物:脱氧葡萄糖10 mmol/L ......

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